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技術(shù)文章

細(xì)胞裂解液樣本及組織勻漿樣本的正確采集方法

閱讀:7585          發(fā)布時間:2015-6-16

通常我們可用于ELISA檢測的樣本是有多種類型的,如血清、血漿、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清或組織勻漿液等,不同類型的檢測樣本前期的處理方法是不一樣的。正確的處理樣本是保證ELISA檢測的正確性和準(zhǔn)確性的*步,下面簡單介紹一下細(xì)胞裂解液樣本及組織勻漿樣本的正確采集、處理方法。

細(xì)胞裂解液

1) 吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基,用胰酶消化細(xì)胞,加適量培養(yǎng)基將細(xì)胞從培養(yǎng)板上吹下來。懸浮細(xì)胞可省略。

2) 收集細(xì)胞懸液,1000×g離心10min,棄去培養(yǎng)基,用預(yù)冷的PBS潤洗3次。

3) 加入適量的預(yù)冷PBS或細(xì)胞裂解液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)重懸細(xì)胞。通常6孔板一個孔的細(xì)胞量需要150~250μL PBS重懸。

4) 將樣品放入-20℃或-80℃,使樣品冷凍,再放室溫解凍樣品,反復(fù)凍融幾次,使細(xì)胞充分裂解。也可將樣品進行超聲破碎,以達到裂解的目的。

5) 410000×g 離心10min,除去細(xì)胞碎片,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。

組織勻漿液

1) 將組織樣本用PBS (0.01M, PH 7.4) 沖洗,洗去組織表面殘留的血液或雜質(zhì)。

2) 將組織塊稱重,記錄后剪碎,碎塊應(yīng)盡量小,便于勻漿得更充分。

3) 將組織按一定的比例加入預(yù)冷的PBS(臨用前加入蛋白酶抑制劑)勻漿,勻漿時置于冰上或冰浴中。(通常按組織重量:PBS體積=1:9的比例勻漿,例如1g的組織樣本對應(yīng)9mLPBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整,檢測后計算樣品濃度時應(yīng)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù))。

4) 吸取勻漿液到離心管,45000×g 離心5~10min,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。

注意:保證樣本不含NaN3,因為NaN3會抑制HRP的活性,從而導(dǎo)致假陰性的結(jié)果。

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