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技術(shù)文章

ELISA試劑盒常見問題解析

閱讀:1014          發(fā)布時(shí)間:2015-6-23

                                                       ELISA試劑盒問題解析
    設(shè)計(jì)ELISA復(fù)孔檢查時(shí),是對(duì)同一個(gè)樣品作兩次稀釋,再分別加到板上的兩個(gè)孔,還是只稀釋一次,然后吸取兩次分別加到兩個(gè)孔?前者似乎把稀釋時(shí)的誤差也考慮到了,但做出來的結(jié)果兩個(gè)孔相關(guān)挺大的。而較常使用的是哪種稀釋方法?
    為了減小誤差,是先稀釋再加樣。而針對(duì)這位客戶所遇到的疑問,我公司技術(shù)人員是這樣解說的:
    1. 前者測的是稀釋和移液的誤差,后者只有移液誤差。
    2. 一般都是稀釋一次,分兩孔吧。同濃度的分復(fù)孔。
    3. 由于是從同一原液稀釋,一般不考慮稀釋誤差(稀釋誤差是存在的),都是稀釋到想要的倍數(shù)直接分孔(而不是一一稀釋,這樣可以使稀釋誤差減小)。
    4. 復(fù)孔是為了排除移液體積,板的影響,以及其他系統(tǒng)誤差的,要求復(fù)孔的濃度是一致的。稀釋后分孔能滿足此要求,一一稀釋不能。

ELISA操作技巧
    1.操作前應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)的物理參數(shù)有充分的了解,如環(huán)境溫度(保持在18 C~25℃)、反應(yīng)孵育溫度和孵育時(shí)間、洗滌的次數(shù)等,要先查看水育箱溫度,ELISA試劑盒是否符合要求。
    2.正確使用加樣器加樣器應(yīng)垂直加入標(biāo)本或試劑,避免刮擦包被板底部。加樣過程中避免液體外濺,血清殘留在反應(yīng)孔壁上,加樣器吸頭要清洗干凈,避免污染,加樣次序要與說明書一致,否則可導(dǎo)致結(jié)果錯(cuò)誤,實(shí)驗(yàn)重復(fù)性差。
    3.手工洗板加洗液時(shí)沖擊力不要太大,洗滌次數(shù)不要超過說明書推薦的洗滌次數(shù),洗液在反應(yīng)孑L內(nèi)滯留的時(shí)間不宜太長。不要使洗液在孑L間竄流,造成孔問污染,導(dǎo)致假陰性或假陽性。
    4.要保證加液量一致 我們?cè)谑褂脮r(shí)感覺滴瓶加液不如加樣器好,滴瓶不易控制加液量不準(zhǔn),造成顯色不統(tǒng)一,判斷錯(cuò)誤。
    5.顯色液量不可過多 加樣的工作環(huán)境不能處于陽光直射的環(huán)境下,加顯色系統(tǒng)后要避光反應(yīng),顯色液量不能過多,以免顯色過強(qiáng)。


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