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技術(shù)文章

國慶特獻(xiàn)免疫組化實(shí)驗一抗稀釋注意事項

閱讀:3607          發(fā)布時間:2015-9-30

      如果說明書中有推薦的稀釋比例,請按照該稀釋比例進(jìn)行實(shí)驗。但是由于標(biāo)本類型、實(shí)驗條件、操作環(huán)境等各種因素的影響,推薦濃度僅作為參考。實(shí)驗者需要在推薦濃度周圍進(jìn)行多個濃度梯度的實(shí)驗,從中發(fā)現(xiàn)zui合適的稀釋比例。
  如果說明書沒有推薦稀釋比例,僅注明“Useatanassaydependentdilution",就需要做大量的預(yù)實(shí)驗來摸索zui合適的比例了。未純化的抗體一般在說明書中不會標(biāo)明抗體的濃度,因為大部分全抗血清、培養(yǎng)上清或腹水形式的產(chǎn)品濃度都是沒有經(jīng)過測定的。如果未純化抗體產(chǎn)品的說明書中沒有標(biāo)明其中特異性抗體的濃度,實(shí)驗者可以參考下表中“估計濃度"確定各種實(shí)驗稀釋比例。
一般來說,抗體說明書都會提供一個稀釋度范圍,但是,有些公司生產(chǎn)的抗體,其說明書上沒有提供抗體稀釋度。這是可以理解的,因為如果說明書上標(biāo)明的抗體稀釋度如果高的話,就說明這種抗體效價不高,質(zhì)量不好。為此,實(shí)驗者可以先在網(wǎng)上搜索一些相關(guān)的文獻(xiàn),文獻(xiàn)的方法與材料中一般會把抗體來源以及稀釋度都詳細(xì)的標(biāo)出的。但真正做實(shí)驗時,還是要根據(jù)自己實(shí)驗樣品的情況和檢測指標(biāo)表達(dá)的豐富程度等因素先摸索一下抗體的稀釋度的。
       所以在做預(yù)實(shí)驗時,就采用倍比稀釋法,先做一個梯度,比如1:100,1:200,1:400,1:800,1:1600. 看看在這幾個梯度范圍內(nèi),樣品中的目的蛋白的表達(dá)情況,然后再從中確定你認(rèn)為的稀釋度進(jìn)行正式實(shí)驗,這樣做比較好一些。由于標(biāo)本類型、實(shí)驗條件、操作環(huán)境等各種因素的影響,推薦濃度僅作為參考。
      一抗稀釋液一般為PBS/0.4% Triton X-100/1%BSA。

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