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用什么樣的方法將HRP與抗體球蛋白結(jié)合起來(lái)呢
閱讀:896 發(fā)布時(shí)間:2015-1-27在Elisa試劑盒檢測(cè)中,用什么樣的方法將HRP與抗體球蛋白結(jié)合起來(lái)呢?恒遠(yuǎn)推薦當(dāng)然不能用強(qiáng)烈的方法,因?yàn)閺?qiáng)烈的方法會(huì)使酶和抗體失去活性。故只能用溫和的方法把酶和抗體結(jié)合起來(lái)。因此,必須使用結(jié)合劑。理想的結(jié)合劑應(yīng)具備下列條件:
(1)不影響酶及抗體活性
(2)不產(chǎn)生干擾物質(zhì)
(3)抗體和酶結(jié)合后應(yīng)有較高的產(chǎn)量
(4)不出現(xiàn)非特異性反應(yīng)
(5) 結(jié)合程序簡(jiǎn)便
(6)來(lái)源易、價(jià)廉
目前常用的有戊二醛和過(guò)碘酸鈉二種。由于對(duì)所使用結(jié)合劑的針對(duì)性,因此標(biāo)記的方法也有戊二醛交聯(lián)法和過(guò)碘酸鈉氧化法兩類(lèi)。
1、戊二醛交聯(lián)法:戊二醛是一種能使蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)聯(lián)結(jié)zui常用的雙功能試劑。它有2個(gè)對(duì)稱(chēng)的活性醛基,可分別與酶蛋白和免疫球蛋白上的游離氨基(酚基、味唑基、巰基)以共價(jià)鍵邊接起來(lái)而形成的酶結(jié)合物。
過(guò)碘酸鈉氧化法:本法是目前酶標(biāo)記抗體較好的方法,能使70%酶與90%以上球蛋白結(jié)合。采用本法首先是用氟代二硝基苯(Fluoro dinitro bengene 2.4—硝基苯,F(xiàn)DNB)封閉HRP表面的游離氨基(亦可用甲醛或戊二醛來(lái)封閉),從而提高酶結(jié)合抗體球蛋白的能力,避免酶的自身交聯(lián)。然后用過(guò)碘酸鈉來(lái)氧化HRP表面結(jié)構(gòu)的醣鏈部份(即低聚醣基團(tuán))使成醛基,使其直接與抗體球蛋白上的游離氨基形成共價(jià)鍵而結(jié)合。zui后用硼氫酸鈉還原,使HRP表面醛基能充分與抗體球蛋白上氨基進(jìn)行反應(yīng),使之形成穩(wěn)定的結(jié)合物。