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在Elisa試劑盒檢測中，用什么樣的方法將HRP與抗體球蛋白結(jié)合起來呢？恒遠推薦當然不能用強烈的方法，因為強烈的方法會使酶和抗體失去活性。故只能用溫和的方法把酶和抗體結(jié)合起來。因此，必須使用結(jié)合劑。理想的結(jié)合劑應具備下列條件：

（1）不影響酶及抗體活性

（2）不產(chǎn)生干擾物質(zhì)

（3）抗體和酶結(jié)合后應有較高的產(chǎn)量

（4）不出現(xiàn)非特異性反應

（5）   結(jié)合程序簡便

（6）來源易、價廉

目前常用的有戊二醛和過碘酸鈉二種。由于對所使用結(jié)合劑的針對性，因此標記的方法也有戊二醛交聯(lián)法和過碘酸鈉氧化法兩類。
1、戊二醛交聯(lián)法：戊二醛是一種能使蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)聯(lián)結(jié)zui常用的雙功能試劑。它有2個對稱的活性醛基，可分別與酶蛋白和免疫球蛋白上的游離氨基（酚基、味唑基、巰基）以共價鍵邊接起來而形成的酶結(jié)合物。

過碘酸鈉氧化法：本法是目前酶標記抗體較好的方法，能使70%酶與90%以上球蛋白結(jié)合。采用本法首先是用氟代二硝基苯（Fluoro dinitro bengene 2.4—硝基苯，F(xiàn)DNB）封閉HRP表面的游離氨基（亦可用甲醛或戊二醛來封閉），從而提高酶結(jié)合抗體球蛋白的能力，避免酶的自身交聯(lián)。然后用過碘酸鈉來氧化HRP表面結(jié)構(gòu)的醣鏈部份（即低聚醣基團）使成醛基，使其直接與抗體球蛋白上的游離氨基形成共價鍵而結(jié)合。zui后用硼氫酸鈉還原，使HRP表面醛基能充分與抗體球蛋白上氨基進行反應，使之形成穩(wěn)定的結(jié)合物。