小鼠泰澤病原體抗體酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒

病原體抗體本試劑盒用于測(cè)定小鼠血清，血漿及相關(guān)液體樣本中泰澤病原體抗體。

實(shí)驗(yàn)原理：

    本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法(ELISA )測(cè)定標(biāo)本中小鼠泰澤病原體抗體。用純化

的小鼠泰澤病原體抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中泰澤病原體抗體相結(jié)合，經(jīng)

洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與 HRP 標(biāo)記的泰澤病原體抗原結(jié)合，形成抗原-抗體

-酶標(biāo)抗原復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，

并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值)，與

CUTOFF 值相比較，從而判定標(biāo)本中小鼠泰澤病原體抗體的存在與否。

病原體抗體試劑盒組成：

試劑盒組成 48孔配置 96孔配置 保存

說(shuō)明書(shū) 1 份 1 份

封板膜 2 片(48) 2 片(96)

密封袋 1 個(gè) 1 個(gè)

酶標(biāo)包被板 1×48 1×96 2-8℃保存

陰性對(duì)照 0.5ml×1 瓶 0.5ml×1 瓶 2-8℃保存

陽(yáng)性對(duì)照 0.5ml×1 瓶 0.5ml×1 瓶 2-8℃保存

酶標(biāo)試劑 3 ml ×1 瓶 6 ml ×1 瓶 2-8℃保存

樣品稀釋液 3 ml ×1 瓶 6 ml ×1 瓶 2-8℃保存

顯色劑A 液 3 ml ×1 瓶 6 ml ×1 瓶 2-8℃保存

顯色劑B 液 3 ml ×1 瓶 6 ml ×1 瓶 2-8℃保存

終止液 3ml ×1 瓶 6ml ×1 瓶 2-8℃保存

濃縮洗滌液 (20ml×20倍)×1 瓶 (20ml×30倍)×1 瓶 2-8℃保存

病原體抗體樣本處理及要求：

1. 血清：室溫血液自然凝固 10-20 分鐘，離心 20分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上

清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。

2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合 10-20 分鐘后，離心

20分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次

離心。

3. 尿液：用無(wú)菌管收集，離心 20分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程

中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心 20分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/

分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS (PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞

濃度達(dá)到100 萬(wàn)/ml 左右。通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心 20分

2

鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS ，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)?/span>

用。標(biāo)本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS (PH7.4)，用手工或勻漿器

將標(biāo)本勻漿充分。離心 20分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待

檢測(cè)，其余冷凍備用。

6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上

進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP )活性。

操作步驟：

1. 編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照 2 孔、陽(yáng)性對(duì)照 2 孔、空白對(duì)照 1

孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)

2. 加樣：分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照50μl 。然后在待測(cè)樣品孔先

加樣品稀釋液 40μl ，然后再加待測(cè)樣品 10μl 。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不

觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，

3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育30 分鐘。    

4. 配液：將30(48T 的20倍)倍濃縮洗滌液加蒸餾水至 600ml 后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30秒后棄去，如此

重復(fù)5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl ，空白孔除外。

7. 溫育：操作同 3。

8. 洗滌：操作同 5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A 50 μl ，再加入顯色劑 B 50 μl ，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

15分鐘

10. 終止：每孔加終止液 50μl ，終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止

液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。

病原體抗體結(jié)果判定：

試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00;  陰性對(duì)照平均值≤0.10

    臨界值(CUT OFF)計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15

    陰性判定：樣品 OD值< 臨界值(CUT OFF)者為小鼠泰澤病原體抗體陰性

    陽(yáng)性判定：樣品 OD值≥ 臨界值(CUT OFF)者為小鼠泰澤病原體抗體陽(yáng)性

病原體抗體注意事項(xiàng)

1．操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未

用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

3．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物請(qǐng)避光保存。

6．試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，參考波長(zhǎng)為 630nm

7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為 2M 的流酸，使用時(shí)必須

注意安全。

3

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6 個(gè)月

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