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在微量滴定板中進(jìn)行可溶性SCFv ElISA的方法

2012-12-22  閱讀(1289)

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1.按每孔100pl蛋白抗原包被微量滴定板,4℃過(guò)夜。PBS中10ug/m1的濃度是包被抗原的標(biāo)準(zhǔn)濃度。但有時(shí)需要更高的濃度或者不同的包被緩沖液(比如碳酸鹽緩沖液)。
2.棄去抗原液并用PBS洗滌板孔2次。
3.加入200gl的2%MPBS封閉每個(gè)板孔,37℃孵育2小時(shí)。
4.用PBS洗滌板孔3次。
5.每孔加入50ul的4%MPBS。
6.每孔加入50ul含可溶性抗體的培養(yǎng)基上清,用移液器反復(fù)吹吸混勻,室溫孵育1小時(shí)。
7.棄去溶液,用PBS/Tween洗滌板孔3次,再用PBS洗滌3次。
8.每孔加入100ul 9E10單抗(用2%MPBS按1:1000稀釋?zhuān)?。室溫孵育孔板l小時(shí)。
9.棄去溶液,用PBS/Tween洗滌板孔3次,再用PBS洗滌3次。
10.每孔加入抗小鼠HRP(用2%MPBS按1:2000稀釋?zhuān)J覝胤跤装?小時(shí)。
11.棄去二抗,并用PBS/Tween和PBS分別洗滌3次。
12.每孔加入100ul TMB系統(tǒng)溶液,并在暗處室溫孵育10~30分鐘。數(shù)分鐘內(nèi),應(yīng)呈現(xiàn)藍(lán)色。
13.每孔加入50~100ul終止液,終止反應(yīng)。
14.在450nm處讀板。

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