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其他生化試劑注意事項與步驟方法

閱讀:522          發(fā)布時間:2021-1-6

其他生化試劑操作步驟 :

1.用蓋片鑷其他生化試劑將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布; 

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片); 

3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時; 

4.將經過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中; 

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

其他生化試劑注意事項:

       1. 其他生化試劑解凍與存放:-20℃取出后建議放入2~8℃冰箱中解凍約,每隔一段時間輕輕搖晃均勻,不可直接放入溫度較高處解凍,避免因溫度改變太大,造成蛋白質凝集而出現(xiàn)沉淀,血清的質量下降。若短期無法用完一瓶,建議無菌分裝,再放回冷凍,避免反復凍融。4℃長時間保存后血清中的變性脂蛋白及纖維蛋白,形成絮狀物質變差。

      2. 其他生化試劑是否滅活:加熱可滅活血清中補體系統(tǒng),在極少數(shù)情況下(培養(yǎng)ES細胞,平滑肌細胞時)建議滅活,在培養(yǎng)其余細胞時不建議滅活血清。血清滅活非常容易產生沉淀,如必須滅活請按56℃,30 min,輕微搖晃原則操作,滅活溫度高、時間長、搖晃不均都容易產生沉淀。

      3.其他生化試劑培養(yǎng)基:無血清培養(yǎng)基在結果重復性、細胞體外分化方面有優(yōu)勢,但是,血清仍然是培養(yǎng)液中基本的添加物,尤其是在原代培養(yǎng)或細胞生長狀態(tài)不良時,常常會先使用有血清的培養(yǎng)液進行培養(yǎng),待細胞生長旺盛后再換成無血清培養(yǎng)液。

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