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撫生試劑-探針標記各種標記物及選擇

閱讀:198          發(fā)布時間:2014-6-5

探針標記各種標記物及選擇
 
    1.核素標記物  放射性核素是目前應用zui多的一類探針標記物。放射性核素的靈敏度*,可以檢測到10-14~10-18克的物質,在zui適條件下可以測出樣品中少于1 000個分子的核酸含量。常用標記核酸探針的核素有32P、3H、35S,在Southern印跡雜交中以“Pzui常用。還應根據標記方法的不同選擇相應標記方位的核素,一般情況下,大多數標記方法需要的是a—32P,而5,末端標記必須是r-32P。
 
    2.非放射性標記物  多年來,科學家們致力于尋找一些安全、可靠、靈敏度高的物質代替放射性核素用于核酸分子雜交,并取得了一定的進展,部分非放射性標記物已在國內外逐步推廣使用。其優(yōu)點是無放射性污染,穩(wěn)定性好,可以較長時間存放,從而更便于臨床診斷等方面的應用。但此類非放射性標記物的缺點是靈敏度及特異性都不太高。根據其檢測方法,非核素標記物可分為以下4類。
 
    (1)半抗原:生物素(biotin)和(DIG)都是半抗原,可以利用這些半抗原的抗體進行免疫學檢測,根據顯色反應檢測雜交信號。這兩種物質是目前使用較普遍的非核素標記物。
 
    (2)配體:生物素不僅是半抗原,還是親和素(avidin)的配體,故可用生物素與親和素反應進行雜交信號的檢測。
 
    (3)熒光素:如FITC、羅丹明類等,可以被紫外線激發(fā)出熒光進行觀察,主要適用于細胞原位雜交。
 
    (4)化學發(fā)光探針:一些標記物可與某種物質反應產生化學發(fā)光現(xiàn)象,通過化學發(fā)光可以像核素一樣直接使X線膠片上的乳膠顆粒感光?;瘜W發(fā)光探針可能是今后非核素標記物研究的主要方向。
 

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