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技術(shù)文章

制備骨髓細(xì)胞染色體的介紹

閱讀:183          發(fā)布時(shí)間:2014-9-22

一、原理
骨髓染色體標(biāo)本制備通常用于白血病患者,特別是慢性或急性粒細(xì)胞性白血病,因?yàn)楣撬璺从沉O到y(tǒng)細(xì)胞增生情況,這些病人不宜用外周血。即
使是淋巴細(xì)胞性白血病,也不主張用外周血,因?yàn)榧覲HA刺激外周血培養(yǎng),只能獲得正常淋巴細(xì)胞分裂相,并不能反映那些病理淋巴細(xì)胞的染色體
改變。(EILSA試劑盒的相關(guān)信息)

骨髓細(xì)胞屬不斷增殖的細(xì)胞,培養(yǎng)可分短期培養(yǎng)和直接制片法,無(wú)論哪種其培養(yǎng)液中均不需加PHA。
二、用品和試劑
同外周血染色體制備。
三、操作步驟
(一)短期培養(yǎng)法
1.取材、培養(yǎng):從髂骨取骨髓液0.2—0.5ml,無(wú)菌注入裝有5ml培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中,37℃培養(yǎng)23—25小時(shí)后,加入秋水仙堿(終濃度為0.07μg/
ml),繼續(xù)培養(yǎng)3—4小時(shí),收獲。
2.染色體制片:低滲、固定、制片及染色同實(shí)驗(yàn)一。
(二)直接制備法
1.從髂骨抽取0.3—0.5ml,立即注入濃度為0.07μg/ml的秋水仙堿的生理鹽水5ml中,以吸管輕輕吸動(dòng),將骨髓中脂肪顆粒充分吸掉,1000rpm
離心8分鐘,棄上清。
2.加入同樣濃度的秋水仙堿生理鹽水2—3ml,室溫放置2—3小時(shí),離心棄上清。
3.染色體制片:低滲、固定、制片及染色同外周血染色體制備。

 

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