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上海慧穎生物科技有限公司

能避免污染細(xì)胞的簡(jiǎn)單培養(yǎng)方法

時(shí)間:2014-2-21閱讀:1702

能避免污染細(xì)胞的簡(jiǎn)單培養(yǎng)方法

具體配液方法:

*步,配制1L培養(yǎng)液。培養(yǎng)基中含有酚紅指示劑,偏堿時(shí)液體為深紅或紫色,偏酸時(shí)則呈黃色。取配1L培養(yǎng)液的粉劑培養(yǎng)基,加入750ml三蒸水或去離子水,搖勻(一般培養(yǎng)液呈橘紅色);再加入碳酸氫鈉1~1.1g,至*溶解(呈深紅色);zui后再加三蒸水或去離子水至1L止。

第二步,插吸管于配好的培養(yǎng)液內(nèi),通入二氧化碳?xì)怏w。隨著二氧化碳?xì)獾娜谌耍后w逐漸變成黃色。用一次性0.22 m孔徑的濾膜于正壓情況下將該液體過(guò)濾除菌。在此過(guò)程中,由于部分二氧化碳?xì)怏w溢出,液體漸成橘黃色。此時(shí)迅速將其分裝到4個(gè)250ml的瓶?jī)?nèi),一定塞嚴(yán)或擰緊瓶。在無(wú)菌情況下取樣本數(shù)毫升,37。c無(wú)菌培養(yǎng)72h,確定該批培養(yǎng)液無(wú)污染后方可使用。常使用的培養(yǎng)液存放于4℃冰箱內(nèi),其它暫時(shí)不用的可放入一20。c冰箱內(nèi)保存。

第三步,根據(jù)不同細(xì)胞系的需求添加不同量血清和抗生素。將配好的培養(yǎng)液吸入小培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),再將適量細(xì)胞吸入,塞嚴(yán)或擰緊瓶蓋,置37。c普通隔水式恒溫箱內(nèi)即可。操作過(guò)程中因有少量二氧化碳?xì)怏w溢出,液體呈橘紅色,酸堿度(pH) 約為7.0~7.2。如果細(xì)胞較少或者生長(zhǎng)較慢。液體的pH值似宜偏酸些為好。

 

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