国产精品视频一区二区三区四,亚洲av美洲av综合av,99国内精品久久久久久久,欧美电影一区二区三区电影

上海慧穎生物科技有限公司

HEK-293-6e細胞培養(yǎng)

時間:2014-4-11閱讀:2351

HEK-293-6e細胞培養(yǎng)

使用F17+L谷氨酰胺培養(yǎng)液,37℃ 下置于5%CO2培養(yǎng)箱中。待細胞融合至80%,用0.25%胰酶消化傳代后接種(細胞密度5 XlO4)于培養(yǎng)瓶或孔板,待細胞融合至約70%后用于實驗。

細胞培養(yǎng)方法如下: 

1.貼壁細胞細胞換液:

1)吸光培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液。

2)用1xD-hank`s洗一次。

3)加入適量的新鮮培養(yǎng)液,接種于新的培養(yǎng)瓶內,放入培養(yǎng)箱內培養(yǎng)。

2.懸浮細胞換液

1)吸光培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液放入15ml離心管中離心1500rpm 5min。

2)細胞沉淀用1xD-hank`s洗一次。

3)加入適量的新鮮培養(yǎng)液,接種于新的培養(yǎng)瓶內,放入培養(yǎng)箱內培養(yǎng)。

3.細胞傳代(貼壁細胞傳代采用胰酶消化法,常用消化液為0.25%的胰蛋白液)

1)吸光培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液。

2)用1xD-hank`s洗一次。

3)加入0.5ml-1ml 0.25%的胰蛋白酶液(以消化液能覆蓋整個瓶底為準)。

4)靜止2-10分鐘(顯微鏡下動態(tài)監(jiān)測)。

5)吸去胰蛋白酶液,加入培養(yǎng)基。

6)用吸管吸取瓶內培養(yǎng)液,反復吹打瓶壁細胞,形成細胞懸液。

7)吸取1/5-1/10細胞懸液接種于新的培養(yǎng)瓶內。

8)加入適量的新鮮培養(yǎng)液,接種于新的培養(yǎng)瓶內,放入培養(yǎng)箱內培養(yǎng)。

4.細胞的凍存:

1)預先配制凍存液:90%胎牛血清+10%DMSO

2)取對數(shù)期生長細胞經(jīng)胰酶消化后加入培養(yǎng)液終止胰酶反應,離心(1500rpm 5min)去上清留沉淀加適量凍存液,用吸管吸打制成細胞懸液(1 XlO5-5X106/ml)

3)加入1ml細胞懸液于凍存管中,密封后標記凍存細胞名稱和凍存日期。

5.細胞復蘇:

1)從液氮中取出凍存管,迅速投入37度-38度水浴中

2)使其融化5min內用培養(yǎng)液稀釋至原液體的10倍以上,低速離心1500rpm 5min

3)去上清,加入培養(yǎng)液,細胞轉入培養(yǎng)器皿中進行培養(yǎng)

 

 

如果培養(yǎng)基還未到,我們建議離心,離心后分別收集細胞和培養(yǎng)基。取5ML培養(yǎng)基重懸細胞沉淀。接種于T25培養(yǎng)瓶中。

會員登錄

X

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標簽最多10個字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復您~

以上信息由企業(yè)自行提供,信息內容的真實性、準確性和合法性由相關企業(yè)負責,化工儀器網(wǎng)對此不承擔任何保證責任。

溫馨提示:為規(guī)避購買風險,建議您在購買產(chǎn)品前務必確認供應商資質及產(chǎn)品質量。

撥打電話
在線留言
太白县| 通江县| 大洼县| 平顺县| 大庆市| 麻城市| 贵南县| 丰城市| 沁水县| 呼玛县| 犍为县| 织金县| 潜江市| 集贤县| 蒙自县| 淳安县| 简阳市| 大姚县| 洱源县| 柞水县| 灯塔市| 赣州市| 黄冈市| 綦江县| 华阴市| 天镇县| 丘北县| 元阳县| 湘潭市| 建阳市| 松桃| 望谟县| 东阳市| 河间市| 任丘市| 儋州市| 襄垣县| 庆云县| 二手房| 丰顺县| 甘泉县|