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華洋科儀

圓二色光譜可以簡單快速準確地測定蛋白質二級結構

時間:2019-10-17 閱讀:4520
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蛋白質是由氨基酸通過膚鍵連接而成的具有特定結構的生物大分子。在蛋白質中,氨基酸的a一碳原子是不對稱碳原子,具有光學活性,蛋白質的膚鏈走向也是不對稱的結構,也具有光學活性,當平面圓偏振光通過這些光活性的生色基團時,光活性中心對平面圓偏振光中的左、右圓偏振光的吸收不相同,產生了吸收差值,由于這種吸收差的存在,造成了偏振光矢量的振幅差,圓偏振光變成了橢圓偏振光,這就是蛋白質的圓二色性。通過測定蛋白質溶液的圓二色性,可以研究蛋白質的二級結構及其變化信息。

圓二色光譜是目前應用較為廣泛的測定蛋白質二級結構的方法,是研究稀溶液中蛋白質構象的一種快速、簡單、較準確的方法。它可以在溶液狀態(tài)下進行測定,較接近其生理狀態(tài)。而且測定方法快速簡便,對構象變化靈敏,所以它是目前研究蛋白質二級結構的主要手段之一,并已廣泛應用于蛋白質的構象研究中。

一般蛋白質的圓二色光譜分為兩段,波長范圍在185一245Inn稱為遠紫外區(qū),245一320nln稱近紫外區(qū)。具有不同二級結構的蛋白質或多膚所產生的CD譜帶的位置、吸收的強弱都不相同。a一螺旋結構在靠近192Inn有一正的譜帶,在222和208nm處表現(xiàn)出兩個負的特征肩峰譜帶;p一折疊的CD譜在216nm有一負譜帶,在185一Zoonln有一正譜帶;p一轉角在206lun附近有一正CD譜帶。遠紫外區(qū)是蛋白質膚鏈的吸收峰,反映了主鏈的構象。因此,可利用這一區(qū)域的CD光譜推算蛋白質分子中的a一螺旋、p一折疊、p一轉角以及無規(guī)卷曲的含量。因此,可以利用圓二色光譜分析經動態(tài)超高壓微射流均質處理后的卵清蛋白的二級結構變化情況。

 

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