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東曹(上海)生物科技有限公司

層析柱的使用方法

時間:2023-6-26 閱讀:1758
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層析柱是凝膠層析技術中的主體,一般用玻璃管或有機玻璃管。凝膠過濾層析是利用一定大小孔隙的具有網(wǎng)狀結構的凝膠作層析介質(如葡聚糖凝膠、瓊脂 糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠等),根據(jù)被分離物質的分子大小、形狀不同擴散到凝膠孔隙內(nèi)的速度不同,因而通過層析柱的快慢不同而分離的一種層析法。下面來介紹一下層析柱的使用方法。
 
1.填裝之前,檢查層析柱各接頭、部件不能有破損漏氣,并將層析柱清洗干凈,壁上不要有殘留小顆粒,會影響層析效果。
2.確保填料、層析柱、所有的緩沖液以及樣品溫度一致,溫度不一致容易導致產(chǎn)生氣泡。
3.所有過柱子的液體(包括水、平衡緩沖液、洗脫緩沖液、再生溶液)用0.45um濾膜抽濾,并進行超聲脫氣,注意填料不可超聲脫氣。
4.將填料用純水清洗幾遍,洗掉保存液,并將上層的細小顆粒棄去。
5.關閉層析柱出水口,玻璃棒引流往層析柱內(nèi)倒入約1/4柱體積的水(或緩沖液),務必使底端無氣泡。
6.將填料用玻璃棒攪勻成懸漿,用玻璃棒引流,均勻的一次性倒入柱子內(nèi),注意務必不要產(chǎn)生氣泡,待柱子內(nèi)填料穩(wěn)定,打開出液管,使凝膠在柱內(nèi)自由沉降。
7.如果是手動操作,將柱子用純水沖幾個柱體積,使柱床穩(wěn)定。
如果儀器操作,用逐漸加大流速的方法,將填料壓實,注意:既不能過松,也不能過緊,要注意不能超過填料的耐壓。
8.上樣前,樣品要進行離心或者用0.45um濾膜過濾。

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