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東曹(上海)生物科技有限公司

疏水色譜柱具有哪些特點(diǎn)?

時(shí)間:2023-7-31 閱讀:1315
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疏水色譜柱是利用樣品分子與固定相的疏水力作用的不同,用流動(dòng)相洗脫時(shí),各組分遷移速度不同而達(dá)到分離的目的。流動(dòng)相一般為pH 6-8的鹽水溶液,具有對(duì)蛋白質(zhì)的回收率高,蛋白質(zhì)變性可能性小等優(yōu)勢(shì)。由于流動(dòng)相中不使用有機(jī)溶劑,也有利于蛋白質(zhì)保持固有的活性。
 
不同于反相色譜,在疏水反應(yīng)色譜中上述官能團(tuán)的密度較低,且蛋白分子只在一個(gè)或少數(shù)幾個(gè)位置上吸附。
鹽濃度較高時(shí)會(huì)產(chǎn)生吸附作用,但若加入低百分比濃度的有機(jī)溶劑降低鹽濃度,則會(huì)產(chǎn)生脫附作用。
盡管二者均以疏水作用為基礎(chǔ),但HIC分離的選擇性明顯不同于反相LC。
相對(duì)于RPC,HIC的最高容量較低,但其優(yōu)勢(shì)在于:流動(dòng)相條件(主要是含水流動(dòng)相)通常不會(huì)破壞高階蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)。
 
TSKgel Phenyl-5PW疏水色譜柱(HIC)能夠有效分離抗體的結(jié)構(gòu)同分異構(gòu)體。在抗體藥物中,對(duì)于一些由于等電點(diǎn)相同而無(wú)法通過(guò)離子交換色譜法實(shí)現(xiàn)分離的,但表面疏水性有差異的結(jié)構(gòu)同分異構(gòu)體、或多聚體,可以考慮使用疏水色譜法來(lái)進(jìn)行分析。并且疏水色譜法也可以用于抗體降解產(chǎn)物的分析。

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