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商鋪：http://m.duoo135.com/st236594/
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技術(shù)文章
小鼠單抗Ig類/亞類鑒定用ELISA試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
點(diǎn)擊次數(shù)：1238 發(fā)布時(shí)間：2013-3-15
您好！感謝您選擇了我們的產(chǎn)品，請(qǐng)您在讀完此說(shuō)明書(shū)后再開(kāi)始您的實(shí)驗(yàn)，這對(duì)您順利完成實(shí)驗(yàn)很有幫助。
一、試劑原理：本試劑盒利用雙抗體夾心法鑒定小鼠淋巴細(xì)胞雜交瘤培養(yǎng)上清中單克隆抗體或特異親和純化的單克隆抗體的類和亞類（可區(qū)分出IgG1\IgG2a\IgG2b\IgG3\IgM\IgA）。采用小鼠抗體共有位點(diǎn)的二抗包被微孔板，與加入的培養(yǎng)上清中的小鼠抗體結(jié)合，再加入HRP標(biāo)記的抗小鼠各類、亞類的抗體來(lái)分別反應(yīng)，zui后用TMB底物系統(tǒng)顯色并用稀硫酸終止，再通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)吸光度來(lái)判斷被測(cè)單克隆抗體的類或亞類。本試劑盒具有*的分辨率，是您鑒定小鼠單克隆抗體類、亞類的可靠工具。
二、組成成分：
| 酶標(biāo)板 含自封袋2個(gè) | 2ⅹ96孔 | 標(biāo)本稀釋液 | 15ml |
| 通用陽(yáng)性對(duì)照 | 1ml | 顯色劑A | 15ml |
| 通用陰性對(duì)照 | 1ml | 顯色劑B | 15ml |
| 酶標(biāo)二抗 6種 | 6×4ml | 反應(yīng)終止液 | 15ml |
| 20×清洗液 | 60mL | 加樣圖 | 2份 |
| 封板膜 | 4張 | 說(shuō)明書(shū) | 1份 |
三、使用范圍：用于雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清中小鼠單克隆抗體Ig類、亞類的鑒定以及相關(guān)內(nèi)容的研究。
四、使用方法：
1、首先將試劑盒恢復(fù)室溫（大約30分），然后用純水把清洗液配成工作濃度（一份濃縮清洗液加19份純水）。
2、取出酶標(biāo)板。每個(gè)標(biāo)本需要6孔，陽(yáng)性對(duì)照6孔，陰性對(duì)照6孔。多余的用自封袋保存，記得放入干燥劑。
3、將細(xì)胞培養(yǎng)上清（或特異親和純化的抗體）50μl加入酶標(biāo)微孔板，每個(gè)標(biāo)本加6孔，陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照也是各加6孔每孔50μl。然后每孔再加入50μl標(biāo)本稀釋液。貼上封板膜37℃溫育30-40分鐘。
4、棄去板內(nèi)液體，洗板5遍后在不掉纖維的吸水材料上拍干或機(jī)洗5遍。再在每個(gè)標(biāo)本的6孔中分別加入6種酶標(biāo)二抗各100μl，通用陽(yáng)性對(duì)照的6孔也一樣。在加樣圖上或酶標(biāo)板上做好標(biāo)記。貼上封板膜37℃溫育30-40分鐘。
5、吸棄板內(nèi)液體，洗板5遍后在不掉纖維的吸水材料上拍干或機(jī)洗5遍。每孔分別加入顯色劑A和顯色劑B各50μl，換一張新的封板膜貼板避光37℃顯色20-30分鐘。
6、本試劑盒特異性好一般肉眼即可觀察出結(jié)果，看顯色藍(lán)的那個(gè)孔所對(duì)應(yīng)的酶標(biāo)二抗就知道此標(biāo)本的Ig類或亞類。更可將反應(yīng)終止液（每孔50μl）終止反應(yīng)后用酶標(biāo)儀450nm測(cè)定波長(zhǎng)，630nm參考波長(zhǎng)雙波長(zhǎng)測(cè)定結(jié)果，參看高值孔所對(duì)應(yīng)的酶標(biāo)二抗就知道此標(biāo)本的Ig類或亞類（陽(yáng)性對(duì)照OD一般不小于0.8，陰性對(duì)照一般不高于0.12，陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)：樣品OD大于陰性O(shè)D+0.15，陰性O(shè)D低于0.05按0.05算）。
五、產(chǎn)品特點(diǎn)：高靈敏度、高特異性、結(jié)果容易判定。（您如果覺(jué)得很多試劑自己可以準(zhǔn)備想省一筆費(fèi)用，那您可以登陸網(wǎng)
站選擇我們?yōu)槟鷾?zhǔn)備的簡(jiǎn)裝抗體鑒定產(chǎn)品C030215。當(dāng)然您也可以下次把標(biāo)本交給我們來(lái)做這樣并且不會(huì)增加太多費(fèi)
用。）
六、保存條件：不開(kāi)啟2-8℃避光保存效期一年。不正確存放或過(guò)于頻繁開(kāi)啟使用有可能因此使效期縮短。
七、注意事項(xiàng)：
1、雖然本試劑盒過(guò)期后很久還有使用價(jià)值但還是請(qǐng)您在有效期內(nèi)使用。
2、在檢測(cè)腹水類單抗時(shí)要稀釋到1/5萬(wàn)，雖然可以分辨但并不建議您這樣做。此類樣品成分十分復(fù)雜，有干擾結(jié)果的可能。在此種情況下您可以選擇本公司的C030215抗體鑒定試劑。它會(huì)給您帶來(lái)滿意的結(jié)果。
3、手洗板子時(shí)一定要把孔加滿，停留10秒然后棄盡，zui后要拍干凈。特別是在酶標(biāo)二抗溫育后洗板時(shí)一定要把酶吸出而不是甩出，要吸凈。這個(gè)在手工洗板時(shí)對(duì)結(jié)果很重要。
4、一次沒(méi)用完的板子要帶干燥劑放自封袋封好，隨盒存放。
5、拿放板子時(shí)不要?jiǎng)×叶秳?dòng)，以免孔間交叉污染出現(xiàn)錯(cuò)誤結(jié)果。
6、本試劑一般不會(huì)出現(xiàn)兩個(gè)陽(yáng)性，但出現(xiàn)兩個(gè)陽(yáng)性的現(xiàn)象不論在進(jìn)口或國(guó)產(chǎn)試劑中都是真實(shí)存在的，一般會(huì)一個(gè)OD很高,另一個(gè)很低但卻還能判為陽(yáng)性，實(shí)驗(yàn)分析表明這種情況下以O(shè)D高值孔為準(zhǔn)，出現(xiàn)這種情況有多重原因：1、培養(yǎng)的細(xì)胞中有“飼養(yǎng)細(xì)胞”殘留，2、抗體本身存在變異，3、融合的淋巴細(xì)胞取自不純的BALB/C，4、樣品為非特異親和純化的抗體或樣品是腹水，5、上清出現(xiàn)少量污染，6、實(shí)驗(yàn)操作粗放，7、加錯(cuò)試劑。
7、陽(yáng)性對(duì)照數(shù)據(jù)并不*一樣，僅作為有效指示。
特別提示：不具備ELISA基礎(chǔ)知識(shí)和操作的人員不要完成此實(shí)驗(yàn)或類似實(shí)驗(yàn)，因?yàn)檫@可能會(huì)給您帶來(lái)錯(cuò)誤的
結(jié)果和不必要的損失，實(shí)驗(yàn)中有疑問(wèn)請(qǐng)CAB技術(shù)咨詢。客服或直接致電.