QQ交談
您所在位置：請輸入產(chǎn)品關(guān)鍵字：
郵編：200431
聯(lián)系人：王小姐
電話：021-56640936
傳真：021-33250231
手機：13122441390 15900755943
留言：發(fā)送留言
個性化：www.shifengsj.com
網(wǎng)址：www.shfeng-edu.com
商鋪：http://m.duoo135.com/st236594/
成纖維細胞的培養(yǎng)和形態(tài)
點擊次數(shù)：1102 發(fā)布時間：2014-10-8
成纖維細胞培養(yǎng)
（一） 原代培養(yǎng)
1、在手術(shù)室無菌條件下，切取新鮮的皮膚，增殖性瘢痕和瘢痕疙瘩組織，修除表皮和皮下組織，鹽水反復(fù)沖洗后放入含PS的DMEM培養(yǎng)液內(nèi)帶回無菌工作間。
2、把組織塊置于培養(yǎng)皿內(nèi)，Hank,s液漂洗三遍后吸凈Hank,s液，眼科剪反復(fù)剪切組織塊成0.5－1mm3大小。用彎頭吸管吸取組織塊接種于40ml培養(yǎng)方瓶瓶壁上，組織塊間留約0.3－0.5cm的間距。
3、 塞好瓶塞，放入37℃電熱恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)3.5小時使培養(yǎng)的組織小塊微干涸。
4、從溫箱中取出培養(yǎng)瓶，向瓶底輕輕注入含20%CS及PS的DMEM培養(yǎng)液5ml，然后緩緩翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，讓培養(yǎng)液慢慢覆蓋附于瓶壁上的組織小塊，置于37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
5、一周后取出培養(yǎng)瓶，棄去瓶內(nèi)培養(yǎng)液，Hank,s液漂洗兩次后加相同的培養(yǎng)液5ml繼續(xù)培養(yǎng)。以后待細胞萌出后，同樣方法每周換液兩次。
（二）傳代培養(yǎng)
待原代培養(yǎng)細胞生長基本融合成片時即可傳代。
1、吸出培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)液，Hank,s液漂洗兩次，向瓶內(nèi)加入0.5%的胰蛋白酶溶液少許以覆蓋瓶底為度。
2、大約1分鐘左右，鏡下觀察細胞胞質(zhì)回縮，細胞間隙增大時立即吸出胰蛋白酶液，加入DMEM培養(yǎng)液終止消化。
3、用吸管吸取培養(yǎng)液輕輕反復(fù)吹打瓶壁細胞使之脫落形成細胞懸液，按1：3比例分裝傳代，加入足量的DMEM培養(yǎng)液后置于37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。
4、每周換液兩次，待細胞融合成單層再次傳代。本實驗均在第4－8代進行。