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技術(shù)文章
小膠質(zhì)細胞原代培養(yǎng)
點擊次數(shù)：1518 發(fā)布時間：2014-11-24
混合膠質(zhì)細胞培養(yǎng)來源于1-2天的大鼠，如同星形膠質(zhì)細胞培養(yǎng)，有輕微的改動。乳鼠斷頭后大腦收集在DMEM-Ham‘s F-12含有1%抗菌素的溶液中。除去腦膜，血管和白質(zhì)后，用機械勻漿法將大腦皮層勻漿，然后將細胞懸液依次通過230μm和104μm孔徑的鋼網(wǎng)過濾，然后用離心法收集細胞，用小膠質(zhì)細胞條件培養(yǎng)基重懸細胞。條件培養(yǎng)基的成分：DMEM-Ham’s F-12培養(yǎng)基，添加2mM L-谷氨酸，1mM 丙酮酸鈉，1×非必須氨基酸，10%胎牛血清和0.5%雙抗溶液。然后接種到培養(yǎng)皿中。
小膠質(zhì)細胞的分離：混合膠質(zhì)細胞培養(yǎng)21天后，小膠質(zhì)細胞通過輕微的胰蛋白酶化作用得到。胰蛋白酶1:3溶解于DMEM-Ham`s F-12 45-60分鐘。胰蛋白酶化作用導致上層含所有膠質(zhì)細胞的細胞層解析，而小膠質(zhì)細胞仍然吸附在培養(yǎng)皿的底層。含有上層裂解細胞的培養(yǎng)基用氣體吹掉，換入新的小膠質(zhì)細胞條件培養(yǎng)基。胰蛋白酶化作用24小時后，分離出來的細胞可用作毒性分析。