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焦磷酸測序（Pyrosequencing）技術(shù)
點(diǎn)擊次數(shù)：1012 發(fā)布時(shí)間：2015-9-16
焦磷酸測序(Pyrosequencing)技術(shù)是新一代DNA序列分析技術(shù)，該技術(shù)無須進(jìn)行電泳，DNA片段也無須熒光標(biāo)記，操作極為簡便。
Pyrosequencing技術(shù)是由4種酶催化的同一反應(yīng)體系中的酶級聯(lián)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)（參見Pyrosequecing的原理），在每一輪測序反應(yīng)中，只加入一種dNTP，若該dNTP與模板配對，聚合酶就可以將其摻入到引物鏈中并釋放出等摩爾數(shù)的焦磷酸基團(tuán)（PPi）。
PPi可zui終轉(zhuǎn)化為可見光信號，并由PyrogramTM轉(zhuǎn)化為一個(gè)峰值。每個(gè)峰值的高度與反應(yīng)中摻入的核苷酸數(shù)目成正比。然后加入下一種dNTP，繼續(xù)DNA鏈的合成。
焦磷酸測序(Pyrosequencing)技術(shù)瑞典Pyrosequencing AB公司基于Pyrosequencing技術(shù)而研究開發(fā)的PSQ 96系統(tǒng)是一個(gè)理想的遺傳分析技術(shù)平臺，它既可進(jìn)行DNA序列分析，又可進(jìn)行基于序列分析的SNP檢測及等位基因頻率測定。我公司是早引進(jìn)PSQ 96 MA 技術(shù)平臺的公司之一，它具有以下優(yōu)點(diǎn)：
不需要制膠，不需要毛細(xì)管，也不需要熒光染料和同位素。 10分鐘內(nèi)可分析96個(gè)樣品的snp，可滿足高通量分析的要求。 每個(gè)樣品孔都可進(jìn)行獨(dú)立的測序或SNP分析，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)靈活。 序列分析簡單，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。
Pyrosequencing技術(shù)的原理
Pyrosequencing是一項(xiàng)全新的dna測序技術(shù)，可以快速、準(zhǔn)確地測定一段較短的目標(biāo)片段。其基本原理如下：
第1步：1個(gè)特異性的測序引物和單鏈DNA模板結(jié)合，然后加入酶混合物(包括DNA Polymerase、ATP Sulfurylase、Luciferase和Apyrase)和底物混合物(包括APS和Luciferin)。