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PCR技術(shù)的原理與方法
點(diǎn)擊次數(shù)：1305 發(fā)布時(shí)間：2015-10-12
PCR定義
PCR（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是指在DNA聚合酶催化下，以母鏈DNA為模板，以特定引物為延伸起點(diǎn)，通過(guò)變性、退火、延伸等步驟，體外復(fù)制出與母鏈模板DNA互補(bǔ)的子鏈DNA的過(guò)程。是一項(xiàng)DNA體外合成放大技術(shù)，能快速特異地在體外擴(kuò)增任何目的DNA。可用于基因分離克隆，序列分析，基因表達(dá)調(diào)控，基因多態(tài)性研究等許多方面。
PCR技術(shù)的基本原理
一.pcr反應(yīng)成分：
1.模板DNA；2.引物；3.四種脫氧核糖核苷酸；
4.dna聚合酶；5.反應(yīng)緩沖液、Mg2+等。
二.PCR反應(yīng)基本步驟：
1.變性：高溫使雙鏈DNA解離形成單鏈（94℃，30s）。
2.退火：低溫下，引物與模板DNA互補(bǔ)區(qū)結(jié)合（55℃，30s）。
3.延伸：中溫延伸。DNA聚合酶催化以引物為起始點(diǎn)的DNA鏈延伸反應(yīng)（70～72℃，30～60s）
PCR技術(shù)的原理與方法
1.變性(denaturation)：通過(guò)加熱使模板DNA的雙鏈之間的氫鍵斷裂，雙鏈分開(kāi)而成單鏈的過(guò)程。
2.退火(annealling)：當(dāng)溫度降低時(shí)，引物與模板DNA中互補(bǔ)區(qū)域結(jié)合成雜交分子。
3.延伸(extension)：在DNA聚合酶、dNTPs、 Mg2+存在下，DNA聚合酶催化引物按5’→3’方向延伸，合成出與模板DNA鏈互補(bǔ)的DNA子鏈。
以上述三個(gè)步驟為一個(gè)循環(huán)，每一循環(huán)的產(chǎn)物均可作為下一個(gè)循環(huán)的模板，經(jīng)過(guò)n次循環(huán)后，目的DNA以2n的形式增加。
PCR技術(shù)的原理與方法
PCR技術(shù)的原理與方法