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放射免疫對流電泳實(shí)驗(yàn)原理和技巧
最近更新時(shí)間：2013-8-1
提 供 商：上海士鋒生物科技有限公司資料大小：14KB
文件類型：JPG 圖片下載次數(shù)：350次
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詳細(xì)介紹：
（一）原理
將放射性元素標(biāo)記的抗體（或抗原）與相應(yīng)的抗原（或抗體）沉淀時(shí)，沉淀線通過自顯影而證實(shí)。所謂自顯影，就是通過復(fù)合物中的標(biāo)記同位素在蛻變過程中 放出的射線，作用于感光材料的鹵化銀晶體而產(chǎn)生潛影，再經(jīng)過顯影把“像”顯示出來。這樣，能檢出肉眼看不見的沉淀線，從而提高反應(yīng)的敏感性，這種方法可應(yīng) 用于凝膠中的所有反應(yīng)。
（二）材料
1.放射性同位素標(biāo)記的抗原或抗體
2.X—射線膠片或全色膠片
3.顯影液與定影液
4.其它同對流免疫電泳
（三）操作方法
1.按對流免疫電泳制備凝膠板并打孔。
2.加樣 陰孔內(nèi)加抗原，陽孔內(nèi)加抗體。在加被檢抗體樣品時(shí)，迅速加入標(biāo)記抗原（2 000~3 000cpm），并使之混合，勿使抗原吸收后再加標(biāo)記抗原，以免由于標(biāo)記原的滯面而形成假陽性。
3.電泳 電流2.6cm×7.5cm的小板用4mA。
4.電泳后，平板浸在3%HCl中漂洗8h，換液2次。
5.用流水漂洗。
6.干燥 室溫或鼓風(fēng)機(jī)吹干。
7.曝光 在暗室將膠片切成與平板一樣大小，然后將藥面密接凝膠面，再在膠片上壓一張玻板，用黑布包嚴(yán)，皮筋扎緊，曝光時(shí)間與所用同位素及保存期有關(guān)。181I，一周內(nèi)5h~10h;1~2周內(nèi)24h;2~3周內(nèi)48h。125I，在2個(gè)月內(nèi)10h。
8.沖洗 全色膠片沖片方法，水洗、20℃顯影10min、水洗、定影、水洗、涼干，觀察結(jié)果。
（四）結(jié)果判定
在抗原抗體孔之間形成一條清晰的黑色影像者，判為陽性。