QQ交談
您所在位置：請輸入產(chǎn)品關鍵字：
郵編：200431
聯(lián)系人：王小姐
電話：021-56640936
傳真：021-33250231
手機：13122441390 15900755943
留言：發(fā)送留言
個性化：www.shifengsj.com
網(wǎng)址：www.shfeng-edu.com
商鋪：http://m.duoo135.com/st236594/
士鋒生物蛋白A—膠體金（PAg）復合物的制備方法
最近更新時間：2013-8-7
提 供 商：上海士鋒生物科技有限公司資料大?。?/span>11.3KB
文件類型：JPG 圖片下載次數(shù)：192次
資料類型：未知文件瀏覽次數(shù)：956次
蛋白A—金（PAg）復合物的制備（Slot 和Geuze,1981），主要包含以下四個步驟膠體金液的制備、待標記蛋白質和金溶液的準備、確定膠體金與蛋白A的結合用量比例、膠體金與蛋白A的結合和純化。
（1）膠體金液的制備，應用枸椽酸三鈉還原法（見還原法制備膠體金的五種方法）。
（2）待標記蛋白質和金溶液的準備，同前。注意點是用0.2mol/l K2CO3將金溶液pH調至5.9～6.2之間。
（3）確定膠體金與蛋白A的結合用量比例。取一系列盛有0.1ml膠體金液的小玻璃管，分別加入不同量的蛋白A，5min后，再各加0.25ml 10%的NaCl。如加入的蛋白A濃度不夠，不能穩(wěn)住金粒，在電解質NaCl的影響下，金粒聚合沉淀，溶液由紅變藍。選擇能防止溶液由紅變藍的zui低濃度的蛋白A的量作為兩者的結合比例。以枸椽酸鈉法制成的膠體金每毫升約需要5μg蛋白A來結合，方能保證其穩(wěn)定性。
（4）膠體金與蛋白A的結合和純化，依上法測得所需的比例超過10%，即每30ml膠體中加入2mg蛋白A，5min后，加入0.3ml PEG作為穩(wěn)定劑，然后以15000r/min離心45min（不同方法制備的金離心速度不同），略帶紅色的松散的復合物沉淀即為PAg復合物。小心棄去上清液，加入PBS沖洗，如上，松散的PAg復合物置于PBS溶液中，按0.2mg/ml的比例加入聚乙二醇作為穩(wěn)定劑，保存于硅化的玻璃器皿中備用，也有主張將上述PAg復合物放入3～6ml 5%甘油—0.05%聚乙二醇—0.02%疊氮鈉混合液中，再離心，棄去無色上清液后，收取管底部濃縮純化的PAg復合物置4℃保存。
據(jù)文獻報告，此PAg復合物的原液在4℃可保存達一年之久。