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士鋒生物蛋白提取操作時的需知事項
最近更新時間：2013-9-10
提 供 商：上海士鋒生物科技有限公司資料大?。?/span>14.3KB
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避免蛋白降解
總體規(guī)則：蛋白酶普遍存在，在提取蛋白質(zhì)的步驟中，早些抑制，經(jīng)常抑制
分裝蛋白溶液，儲存于不同的溫度和不同的緩沖液中，測蛋白活性，找出zui適儲存條件。
冷藏，并加入穩(wěn)定劑。這些穩(wěn)定劑一般都能充分保持蛋白的生物學(xué)活性。
將蛋白溶液儲于50%（V/V）的甘油或懸于硫酸銨（3.2M）中，避免凍存
冰結(jié)晶會造成物理剪切及蛋白變性。
避免酶的反復(fù)凍融，如果酶需要凍存，分裝成小管后凍存。
蛋白質(zhì)的儲存
蛋白樣品在液氮中速凍，拿出后加入10-20%的甘油，長期儲存
整個實驗過程中，都要將蛋白樣品置于冰上
從母管中吸取不同的蛋白時，都要用新鮮的槍頭
不要將未用的溶液倒回母管
戴手套操作，避免蛋白交叉污染，或是蛋白酶的污染
避免劇烈的震蕩，避免溶液中混入蛋白變性劑
實驗的過程中應(yīng)避免灰塵進入，灰塵包含60%的肌氨酸
操作過程中
操作時總是小體積小量的操作，避免污染，并且動作要快
下面為常見的蛋白酶類型及相對應(yīng)的抑制劑：
a：此類蛋白酶在活性中心包含絲氨酸和組氨酸。
b：此類蛋白酶在活性中心包含半胱氨酸（巰基，-SH-）。
c：此類蛋白酶在活性中心包含金屬離子（如：Zn2+，Ca2+，Mn2+）。
d：此類蛋白酶在活性中心包含天冬氨酸族。