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士鋒生物細(xì)胞凍存的步驟和注意事項
最近更新時間：2013-10-23
提 供 商：上海士鋒生物科技有限公司資料大小：14.3KB
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細(xì)胞凍存有兩種方法：傳統(tǒng)的方法是利用冷存管處于4℃、 -20℃、 -80℃保存，程序降溫方法是利用程序降溫盒設(shè)定程序由室溫降低至-80℃，zui后再放置到液氮槽中長期保存。程序降溫盒的使用注意事項如下：
實驗室雖然有程序降溫凍存盒，但怎么使用一直都搞不明白，我覺得是不是應(yīng)該把程序降溫凍存盒先從-80度移到室溫放一段時間（細(xì)胞剛開始還沒凍的時候就是室溫），然后把細(xì)胞放進去，再一起移到-80度，這樣才能實現(xiàn)程序降溫呢? 時間使用長了，感覺里面的液體是不是異丙醇啊，使用時間長了會不會揮發(fā)或變質(zhì)什么的，要不要添加或維護一下呢，還有有一只降溫盒因不小心給傾斜讓液體流出了部分，要補充嗎?
經(jīng)驗1：凍存盒外表面有刻度的吧，異丙醇液面要高于zui底線。4 a. C* D8 Y& P9 A, y
凍存盒肯定是先放在室溫，然后放進去細(xì)胞，置于-80，利用異丙醇實現(xiàn)梯度降溫啊。） ~0 O（ O# Q* }: w# D" R' _
根據(jù)論壇里的討論，異丙醇使用過一段時間后是要更換的，但是我一直沒換過，也沒發(fā)現(xiàn)很大問題。
經(jīng)驗2：我們實驗室凍存盒平時放4度，需要凍細(xì)胞時直接拿出來用就可以了。第二天轉(zhuǎn)移至液氮，貴重的細(xì)胞盡快轉(zhuǎn)移，不然會影響復(fù)蘇成活率的。一般是用5次就更換一下異丙醇?，F(xiàn)在也有一些商品化凍存液可以直接丟進-80的，很方便，效果也不錯的。
經(jīng)驗3：異丙醇的量是要保證的，不能低于表明的線，否則不能起到很好的程序性降溫作用，我們是在4度放置，放了細(xì)胞后立馬放到-80度冰箱，第二天再轉(zhuǎn)移到液氮，效果很不錯。異
經(jīng)驗4：應(yīng)該不可以把凍存盒放4°的，因為梯度降溫的起始點是室溫20°左右，所以從-80℃拿出來的凍存盒應(yīng)該現(xiàn)在室溫靜置一段時間待其恢復(fù)到室溫再使用。而其中的異丙醇應(yīng)使用6~7此后更換一次，而且保證液體量達到刻度線，否則降溫效果會受到影響。
經(jīng)驗5：凍存盒里的異丙醇一般是250ml，低于刻度了要加上，理論上是5次以后更換異丙醇，但是異丙醇對環(huán)境有害，我們可以多用幾次，只是少了的時候要加滿。還有凍存液里面的DMSO對細(xì)胞有尤其是室溫的時候，所以凍存盒和凍存液先放4°，等把細(xì)胞用凍存液重懸好了放在凍存盒里，還放回4°，等到出細(xì)胞間的時候再拿到-80°里面保存。再轉(zhuǎn)入液氮。
程序降溫盒這個梯度降溫可大大提高細(xì)胞凍存的存活率，由于程序降溫盒內(nèi)存在100%濃度的異丙醇和泡沫內(nèi)襯，因此程序降溫盒也可以用于細(xì)胞復(fù)蘇。