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士鋒生物基因組DNA提取常見問題分析
最近更新時(shí)間：2013-11-13
提 供 商：上海士鋒生物科技有限公司資料大?。?/span>14.3KB
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◆ 洗滌后硅膠膜上仍有雜色殘留：
細(xì)胞裂解不充分, 裂解液和樣品要快速充分混勻。
◆ 洗脫產(chǎn)物DNA量很少或沒有：
1. 樣品中細(xì)胞或病毒濃度低。
2. 裂解液和樣品混合不均勻造成的細(xì)胞裂解不充分。
3. 蛋白酶k活性下降造成的細(xì)胞裂解不充分。
4. 溫浴時(shí)間不夠造成的細(xì)胞裂解不充分或蛋白降解不*，盡量把組織切成小塊，延長溫浴時(shí)間，使裂解物中沒有顆粒狀物殘留。
5. 在上柱前，裂解物中沒加乙醇，或用低濃度乙醇代替無水乙醇。
6. DNA沒有有效洗脫，提高洗脫效率，可將離心柱在加入洗脫液后在室溫靜置至少1 min，再離心。
7. 洗脫液pH不合適，低pH值會(huì)減少DNA產(chǎn)率。確保洗脫液pH值在7.0-8.5之間。
8. 洗脫體積太大，超過200μl洗脫體積所得的DNA濃度會(huì)降低，但DNA總量不會(huì)減少。
◆ A260/A280 比值較低：
用水作為洗脫液時(shí)，比值偏低。
◆ A260/A280 比值較高：
大量rna殘留，沒有使用RNase A，或RNase A活性下降。
◆ DNA影響后續(xù)酶反應(yīng)實(shí)驗(yàn)：
1. 在洗脫液中有殘留的漂洗液GW，可通過再次離心去除硅膠膜上的GW。
2. 大量RNA殘留。
◆ 在緩沖液GA、GB中有白色沉淀：
白色沉淀可能由于低溫或長時(shí)間放置產(chǎn)生，可在使用前在56℃重新加熱溶解。
◆ 在操作中加入緩沖液GB有白色沉淀：
在緩沖液GB加入后產(chǎn)生的白色沉淀在70℃溫浴時(shí)會(huì)消失，不會(huì)影響下游操作。