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士鋒生物E玫瑰花環(huán)試驗(yàn)介紹
最近更新時(shí)間：2013-11-20
提 供 商：上海士鋒生物科技有限公司資料大?。?/span>14.3KB
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一） 基本原理
玫瑰花環(huán)試驗(yàn)是體外檢測(cè)人和動(dòng)物細(xì)胞免疫功能的一種方法。E—玫瑰花環(huán)試驗(yàn)是T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)的一種重要方法。由于人和動(dòng)物的T淋巴細(xì)胞表面有紅細(xì)胞受體，因此紅細(xì)胞可以粘附到T淋巴細(xì)胞的周圍而形成玫瑰花樣的細(xì)胞團(tuán)。在紅細(xì)胞中，以綿羊紅細(xì)胞zui為常用。b淋巴細(xì)胞則沒有紅細(xì)胞受體，所以不能形成E—玫瑰花環(huán)，以資鑒別。
（二）材料與試劑
1．肝素抗凝劑
2．淋巴細(xì)胞分層液 配制方法見細(xì)胞分離技術(shù)。
用5.6％NaHCO3調(diào)pH至7.2，115℃15min滅菌。4℃貯藏備用。
4．5.6％NaHCO3液
NaHCO3 5.60g
H2O 100.00ml
115℃20min滅菌, 4℃貯藏備用。
5．0.8％戊二醛溶液
25％戊二醛溶液 0.32ml
Hank’s液 9.68ml
用前配制。
6．Giemsa—weight染色液
Giemsa粉 0.03g
Weight粉 0.30g
甲醇 100.00ml
先將染料一起放入研缽內(nèi)，加入少量甲醇，研磨細(xì)，然后倒入瓶?jī)?nèi)，并用甲醇沖洗研缽內(nèi)染料，一起倒入玻瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)足甲醇量，備用。
（三）操作方法
1．取肝素抗凝血2ml，置37℃水浴自然沉淀30min～40min，吸取全部血漿（約1ml）。
2．于血漿中加Hank’s液數(shù)毫升，洗滌，1 500r/min離心5min～10min，棄上清。重復(fù)洗滌4次，沉淀均勻即為淋巴細(xì)胞懸液。