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士鋒小鼠脾細(xì)胞懸液制備
最近更新時(shí)間：2013-12-23
提 供 商：上海士鋒生物科技有限公司資料大?。?/span>50.6KB
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1.小鼠頸椎脫臼處死，75%乙醇浸泡3分鐘，取出小鼠置于無菌紙上，左腹側(cè)朝上；
2.在小鼠左腹側(cè)中部剪開小口，撕開皮膚，暴露腹壁，可見紅色長(zhǎng)條狀脾臟；
3.在脾臟下側(cè)提起腹膜，剪開后上翻，暴露脾臟，用鑷子提起脾臟，眼科剪分離脾臟下面的結(jié)締組織，取出脾臟。放入盛有5ml hanks 液的培養(yǎng)皿中；
4.A：梳刮法：脾臟可用鑷子輕輕梳刮，避免將脾臟弄成碎片，將細(xì)胞懸液吸入離心管中，自然沉降5分鐘，將懸液移至另一離心管中，棄去較大的組織塊，離心沉淀細(xì)胞；B：鋼網(wǎng)研磨法：將脾臟放置不銹鋼網(wǎng)（100或200目）上，用注射器針芯輕輕研壓脾臟，獲細(xì)胞懸液；C：酶消化法：將脾臟用鑷子夾碎，加入400 u/ml膠原酶（III型）5ml/只脾臟，37度消化20分鐘，用尼龍網(wǎng)過濾，得到單細(xì)胞懸液。 注： 1.一般6-8周齡小鼠，根據(jù)品系不同，可得5-20×107細(xì)胞/只小鼠； 2.手術(shù)器械滅菌：術(shù)前高壓滅菌外，也可將手術(shù)器械泡在95%酒精的小容器中，使用前取出器械，在酒精燈上燒灼去除酒精，即可保證無菌，此法較為簡(jiǎn)便。