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公司動態(tài)
細胞內(nèi)鈣測定方法
點擊次數(shù)：1021 發(fā)布時間：2017-9-11
靜息態(tài)時[Ca ]i<0.1umol/L。[Ca ]0濃度為1～１.5mmol/L,細胞內(nèi)外[Ca ]相差104。細胞膜內(nèi)外的[Ca ]差是細胞外的Ca 進入細胞內(nèi)的推動力。
(組織細胞以12.5%胰蛋白酶消化20－30 min)
37℃溫育10min, 加入Fura-2/AM（終濃度為2-5ug/ml），37℃恒溫震蕩45 min,負載后細胞以含0.2%牛血清白蛋白的Hank’s液洗2次，用Hank’s液調(diào)細胞數(shù)為1×106，測定前37℃復(fù)溫5-10 min。
37℃溫育10 min，測熒光（負載Fura-2/AM細胞的熒光比值F）
↓
加Triton X 100 100μl
↓
37℃溫育5 min
↓
340nm測熒光（zui大值Fmax）
↓
20℃水浴5 min
↓
冰浴 2 min
↓
加EGTA 80μl（40mM）
↓
水浴5 min → 冰浴 5 min
↓
380 nm 測定熒光（zui小值Fmin）