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北京諾博萊德科技有限公司

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吖啶橙/溴化乙錠雙熒光染色試劑盒 說明書

最近更新時間:2016-4-29

提 供 商:北京諾博萊德科技有限公司資料大?。?/span>7.5KB

文件類型:JPG 圖片下載次數(shù):102次

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詳細(xì)介紹:

吖啶橙/溴化乙錠雙熒光染色試劑盒

產(chǎn)品簡介:

細(xì)胞凋亡(Apoptosis)的檢測方法有形態(tài)學(xué)、生物化學(xué)、DNA片段化檢測方法以及TUNEL等標(biāo)記片段化DNA方法,但從細(xì)胞凋亡概念產(chǎn)生的歷史及準(zhǔn)確性方面考慮,使用顯微鏡進(jìn)行的形態(tài)學(xué)觀察也是很重要的。細(xì)胞死亡的檢測可以通過熒光色素染色區(qū)分活細(xì)胞、死細(xì)胞,測定細(xì)胞代謝活性和形態(tài)學(xué)觀察。這些方法都是利用細(xì)胞凋亡這種情況進(jìn)行測定的,因而不一定反映實際情況。MTT法是測定線粒體中*酶的活性,反映細(xì)胞數(shù)目的變化,其結(jié)果不細(xì)胞死亡的數(shù)目未必*一致。

吖啶橙(Acridine Orange, AO)屬于三環(huán)雜芳香燃料,可以標(biāo)記DNA、RNA,屬于異染性熒光染料,AO常用于細(xì)胞內(nèi)DNARNA進(jìn)行檢測。AO與核酸結(jié)合方式主要有:1、插入性結(jié)合,AO嵌入核酸雙鏈的堿基對之間,這種結(jié)合方式主要為AODNA的結(jié)合,其熒光収射峰為530nm,激發(fā)后呈綠色熒光;2、靜電吸引,帶正電荷的AO與單鏈核酸的磷酸根(帶負(fù)電荷)產(chǎn)生靜電間的吸引結(jié)合,這種結(jié)合方式主要為AO RNA的結(jié)合,其熒光發(fā)射峰為640nm,激發(fā)后呈紅色熒光,少量結(jié)合會呈桔黃色或桔紅色熒光。因此,吖啶橙嵌合到雙鏈DNA分子中顯綠色,與DNA單鏈或RNA結(jié)合時収橙紅色熒。

溴化乙錠(Ethidium  Bromide,EB)嵌合到雙鏈DNARNA的堿基對中,無堿基特異性,發(fā)紅色熒光。吖啶橙可透過活細(xì)胞膜,EB不能通過與活細(xì)胞膜具有相同通透性的細(xì)胞膜。

產(chǎn)品組成

名稱/編號

D0839

100T

Storage

試劑(A):AO solution  

200ul

4 避光

試劑(B):EB solution

200ul

RT

試劑(C):AO/EB Dilution Buffer

50ml

4 避光

使用說明書

1

 

自備材料:

1、熒光顯微鏡

2、PBS

3、細(xì)胞計數(shù)板

4、載玻片、蓋玻片

 

操作步驟(僅供參考)

1、AO/EB工作液的配制:取試劑(A)、試劑(B)、試劑(C),按照試劑(A):試劑(B):試劑(C)=1:1:8的比例稀釋成AO/EB工作液。

2、每份細(xì)胞樣品中加入AO/EB工作液2μl,混合均勻。

3、低速離心:500g離心5min,棄上清。

4、用 AO/EB Dilution Buffer重懸細(xì)胞,細(xì)胞計數(shù),將細(xì)胞密度調(diào)整為0.5~5×106/ml

5、每25μl細(xì)胞懸液中,加入1μl AO/EB工作液,充分混勻。

6、取潔凈載玻片,滴加上5μl細(xì)胞懸液,輕輕蓋上蓋玻片。

7、在熒光顯微鏡B域進(jìn)行觀察。

 

染色結(jié)果:

活細(xì)胞

綠色熒光

死細(xì)胞

橙色熒光

注意事項:

1、用能通過活細(xì)胞膜與DNA結(jié)合發(fā)藍(lán)色熒光Hoechist 33342和只能通過死細(xì)胞與DNA結(jié)合后發(fā)紅色熒光的碘化吡啶(propidium iodide,PI)對細(xì)胞進(jìn)行雙染的方法也比較常用。

2、如有低溫離心機進(jìn)行離心效果更佳。

3、操作過程中應(yīng)注意減少試劑(A)、試劑(B)暴露于強光下的時間。

4、EB solution 有一定毒性,請小心操作。

5、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 

有效期:6個月有效。

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