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簡單了解鼠抗T2-毒素單克隆抗體的常見問題

閱讀:1545      發(fā)布時間:2020-5-14
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   鼠抗T2-毒素單克隆抗體是由多種鐮刀菌產(chǎn)生的一種霉菌毒素。主要污染小麥、大麥、玉米等糧食作物及其制品,對人類健康及畜牧業(yè)構(gòu)成了較大危害。T2-毒素主要影響血液,肝臟,腎臟,胰腺肌肉及淋巴細(xì)胞的功能,T2-毒素中毒后的一般臨床癥狀為厭食、嘔吐、腹瀉、生長停滯、繁殖和神經(jīng)機(jī)能障礙等。該抗體可運(yùn)用于ELISA、膠體金、免疫親和柱層析等免疫檢測。
  鼠抗T2-毒素單克隆抗體的常見問題
  1.包被抗體或抗原不適,易產(chǎn)生陽性值較小,或產(chǎn)生變異,即跳管現(xiàn)象。
  2.用抗血清不純化,或純化程度太低的抗體包被,則陽性值較小,或沒有陽性梯度。
  3.封閉不好或標(biāo)記物過濃可產(chǎn)生對照值較高。
  制備并鑒定抗T-2毒素單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株,以期為T-2毒素的快速檢測提供有力的抗體工具。方法:采用琥珀酸酐法將T-2毒素活化為T-2HS,T-2HS在DCC與NHS作用下與牛血清白蛋白(BSA)或卵清白蛋白(OVA)偶聯(lián)合成*抗原。以T-2HS-BSA為抗原,免疫BALB/c小鼠,用ELISA篩選、建立分泌抗T-2毒素抗體的雜交瘤細(xì)胞株。測定單抗免疫球蛋白亞類及單抗效價,用間接競爭法檢測單克隆抗體細(xì)胞株的特異性。結(jié)果:建立了1株穩(wěn)定分泌抗T-2毒素抗體的雜交瘤細(xì)胞株T-1B3,該細(xì)胞株所分泌的單隆抗體Ig亞類為IgG1,ELISA檢測結(jié)果表明抗T-2毒素抗體可以與T-2毒素發(fā)生特異性反應(yīng),工作濃度為1:6.5×104,IC50為3.6ng/ml。該抗體與HT-2毒素的交叉反應(yīng)為65.9%,與黃曲霉毒素?zé)o交叉。結(jié)論:制備出能分泌具有較高特異性和親和力的抗T-2毒素單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株。

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