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一文帶你了解鼠抗赭曲霉毒素A單克隆抗體的制備過程

閱讀：1228 發(fā)布時間：2022-3-16

　　鼠抗赭曲霉毒素A單克隆抗體是由單一B細胞克隆產(chǎn)生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體。通常采用雜交瘤技術(shù)來制備，將具備這種特性的單個雜交瘤細胞培養(yǎng)成細胞群，從根本上解決了在抗體制備中長期存在的特異性和可重復(fù)性問題，可直接用于疾病的診斷、預(yù)防、治療以及免疫機制的研究。

　　鼠抗赭曲霉毒素A單克隆抗體的制備過程：

　　1、免疫動物免疫動物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產(chǎn)生致敏B淋巴細胞的過程。一般選用6-8周齡雌性Balb/c小鼠，按照預(yù)先制定的免疫方案進行免疫注射。抗原通過血液循環(huán)或淋巴循環(huán)進入外周免疫器官，刺激相應(yīng)B淋巴細胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏B淋巴細胞。

　　2、細胞融合采用眼球摘除放血法處死小鼠，無菌操作取出脾臟，在平皿內(nèi)擠壓研磨，制備脾細胞懸液。將準(zhǔn)備好的同系骨髓瘤細胞與小鼠脾細胞按一定比例混合，并加入促融合劑聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各種淋巴細胞可與骨髓瘤細胞發(fā)生融合，形成雜交瘤細胞。

　　3、選擇性培養(yǎng)選擇性培養(yǎng)的目的是篩選融合的雜交瘤細胞，一般采用HAT選擇性培養(yǎng)基。只有融合的雜交瘤細胞由于從脾細胞獲得了次鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，并具有骨髓瘤細胞能無限增殖的特性，因此能在HAT培養(yǎng)基中存活和增殖。

　　4、雜交瘤陽性克隆的篩選與克隆化在HAT培養(yǎng)基中生長的雜交瘤細胞，只有少數(shù)是分泌預(yù)定特異性單克隆抗體的細胞，因此，必須進行篩選和克隆化。通常采用有限稀釋法進行雜交瘤細胞的克隆化培養(yǎng)。

　　5、單克隆抗體的大量制備單克隆抗體的大量制備重要采用動物體內(nèi)誘生法和體外培養(yǎng)法。

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