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用小鼠elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)的雙位點(diǎn)一步法

閱讀:1284          發(fā)布時(shí)間:2014-3-24

    對(duì)elisa實(shí)驗(yàn)有了解的朋友們知道,它可以用于測(cè)定抗原,也可用于測(cè)定抗體。在這種測(cè)定方法中有三種(固相的抗原或抗體、酶標(biāo)記的抗原或抗體、酶作用的底物)必要的試劑,我們根據(jù)試劑的來(lái)源和標(biāo)本的性狀以及檢測(cè)的具備條件,可設(shè)計(jì)出各種不同類型的檢測(cè)方法。
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 在雙抗體夾心法測(cè)定抗原時(shí),如應(yīng)用針對(duì)抗原分子上兩個(gè)不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標(biāo)抗體,則在測(cè)定時(shí)可使標(biāo)本的加入和酶標(biāo)抗體的加入兩步并作一步。這種雙位點(diǎn)一步不但簡(jiǎn)化了操作,縮短了反應(yīng)時(shí)間,如應(yīng)用高親和力的單克隆抗體,測(cè)定的敏感性和特異性也顯著提高。單克隆抗體的應(yīng)用使測(cè)定抗原的ELISA提高到新水平。
在一步法測(cè)定中,應(yīng)注意鉤狀效應(yīng),類同于沉淀反應(yīng)中抗原過(guò)剩的后帶現(xiàn)象。當(dāng)標(biāo)本中待測(cè)抗原濃度相當(dāng)高時(shí),過(guò)量抗原分別和固相抗體及酶標(biāo)抗體結(jié)合,而不再形成夾心復(fù)合物,所得結(jié)果將低于實(shí)際含量。鉤狀效應(yīng)嚴(yán)重時(shí)甚至可出現(xiàn)假陰性結(jié)果。
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