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細(xì)胞周期分析PI染色法

閱讀:1501      發(fā)布時(shí)間:2013-6-19
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細(xì)胞周期流式檢測(PI染色法)

1. 收集細(xì)胞:若懸浮生長細(xì)胞離心棄培養(yǎng)基,用PBS洗滌一次(建議用PBS + 1% FBS或PBS + 0.1% BSA),若是貼壁生長細(xì)胞,加入合適體積的0.25%胰酶消化一分鐘左右(可顯微鏡觀察待細(xì)胞脫壁),吹起細(xì)胞后加入5ml 含10%血清的培養(yǎng)基,終止作用,轉(zhuǎn)移細(xì)胞至15ml離心管中,300g 離心5分鐘,用PBS洗滌細(xì)胞一次;

2. 用PBS洗滌細(xì)胞一次,300g離心5分鐘后棄上清;

3. 用500ul PBS 重懸細(xì)胞,振蕩混勻后加入5ml 70%冷乙醇溶液(放置在-20度預(yù)冷的70%乙醇溶液),混勻后放置4度過夜(可放置一周);

4. 500g離心5分鐘后棄乙醇,用PBS懸浮細(xì)胞洗滌細(xì)胞一次;

5. 用PBS調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度為5 X 106個(gè)/ml,取500ul細(xì)胞懸液加入100ul  500ug/ml 的PI染色(用PBS配制500ug/ml的PI染色液),4°C避光放置30分鐘;

6. 加入100ul 煮沸過的RNase A (10mg/ml) 37度孵育30分鐘;

7. 混勻細(xì)胞后待上流式儀獲取分析。

 

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