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前幾期小愛依次給大家介紹了螢光素酶報告基因相關知識，想必大家對于螢光素酶報告基因檢測技術有了一定了解。話不多說，本期小愛給大家安利另一款單螢光素酶報告基因檢測試劑盒—愛必信海腎螢光素酶報告基因檢測試劑盒（abs60343）。

一、產(chǎn)品簡介

真核基因表達調(diào)控研究常用的方法是進行報告基因的檢測，生物發(fā)光法又是報告基因檢測常用的有效手段。螢光素酶能催化底物螢光素的轉化，并發(fā)射出光子。海腎螢光素酶跟螢火蟲螢光素酶類似，也是一胞內(nèi)蛋白，但是它從海腎中分離得到，大小為36kDa，發(fā)光作用原理也稍簡單：海腎螢光素酶只需要氧氣就可以催化腔腸素（反應底物），氧化生成高能產(chǎn)物coelenteramide，并發(fā)出藍光，強發(fā)光波長為480nm。其作用反應式為如圖2，海腎螢光素酶報告基因檢測試劑盒（abs60343）可為在哺乳動物細胞中的表達提供快速、靈敏、穩(wěn)定的檢測方法。

圖2 海腎螢光素酶反應化學式

二、產(chǎn)品信息

三、產(chǎn)品特點

1、快速：細胞裂解在 10-15 min 內(nèi)完成。
2、方便：試劑易于配制，樣品檢測步驟簡單。

四、實驗流程

圖3 海腎螢光素酶報告基因檢測試劑盒操作流程

五、具體應用

海腎螢光素酶報告基因檢測試劑盒的適用于單報告基因檢測，與螢火蟲螢光素酶報告基因適用場景類似。具體的應用場景包括而不局限于以下內(nèi)容：

圖4 海腎螢光素酶報告基因檢測試劑盒的應用舉例

六、實驗數(shù)據(jù)

使用海腎螢光素酶報告基因檢測試劑盒與市面上同類產(chǎn)品進行對比實驗，檢測光信號RLU值，本公司產(chǎn)品檢測結果高于同類競品。

七、Q&A

1.檢測的螢光數(shù)值很低怎么辦？

（1）可能為轉染效率低

a.優(yōu)化轉染實驗條件，用較易轉染的質(zhì)粒做陽性對照（如轉染過表達螢光蛋白質(zhì)粒）；
b.確保轉染DNA的質(zhì)量，可通過酶切或瓊脂糖凝膠電泳的方法對DNA質(zhì)量進行鑒定；
c.選擇活性較高，處于指數(shù)分裂期的細胞進行轉染。

（2）可能為啟動子活性低或誘導失敗
a.轉染后的細胞培養(yǎng)使用特異性誘導啟動子的條件；
b.優(yōu)化細胞的培養(yǎng)條件，提高螢光素酶的表達量；
c.更換強啟動子（如SV40、CMV）。

（3）樣品裂解效率低
a.細胞培養(yǎng)時間不宜過長，12-36h內(nèi)最好，長時間培養(yǎng)后，細胞可能會難裂解。
b.加入的裂解液需足量，保證細胞能夠充分裂解。

（4）檢測過程操作不規(guī)范
a.選擇合適的檢測儀器，能夠檢測化學發(fā)光或者生物發(fā)光的儀器都適用于該實驗；
b.需加入足量底物，保證底物的飽和，否則會造成檢測結果出現(xiàn)很大偏差；
c.室溫反應。反應時各個組分（細胞裂解產(chǎn)物，底物工作液等）都需要調(diào)整到室溫；
d.螢光素酶的半衰期一般約30min，加完底物后可立即檢測，盡量在30min內(nèi)完成。

（5）底物氧化失效
a.底物避光密封保存，螢火蟲螢光素酶底物-20℃保存；海腎螢光素酶底物推薦-80℃保存；
b.反應工作液建議現(xiàn)用現(xiàn)配。

2.進行檢測的過程中，螢光信號值太高該如何進行調(diào)整？
（1）減少質(zhì)粒轉染量。

（2）細胞樣品裂解后，離心取上清后檢測或對裂解產(chǎn)物進行稀釋后檢測。
注：不建議通過減少底物量來降低螢光值，需要保證底物的飽和來反映螢光素酶真實的表達水平，否則會造成檢測結果出現(xiàn)大的偏差。

八、注意事項

1、使用前請將產(chǎn)品瞬時離心至管底，再進行后續(xù)實驗。
2、由于溫度對酶反應有影響，所以測定時，樣品和試劑均需達到室溫后再進行測定。
3、海腎螢光素酶催化的生物發(fā)光的zui強波長為480 nm，為防止孔間干擾，建議使用白色不透光孔板。

九、說明書

海腎螢光素酶報告基因檢測試劑盒（abs60343）

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