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流式細(xì)胞儀的調(diào)試和校準(zhǔn)方法

閱讀：1368 發(fā)布時(shí)間：2023-2-22

　　流式細(xì)胞儀是一種用于分析細(xì)胞的技術(shù)，包括細(xì)胞計(jì)數(shù)、表型、細(xì)胞周期評(píng)估和生存能力。流式細(xì)胞儀中激光器產(chǎn)生的光被樣品中的細(xì)胞散射，由檢測(cè)器測(cè)量，然后轉(zhuǎn)化為可分析和測(cè)量的信號(hào)。

　　調(diào)試和校準(zhǔn)

　　流式細(xì)胞儀在使用前，甚至在使用過(guò)程中都要精心進(jìn)行調(diào)試，以保證工作的可靠性和最佳性。調(diào)試的項(xiàng)目主要是激光強(qiáng)度、液流速度和測(cè)量區(qū)的光路等。

　　激光強(qiáng)度：除調(diào)整反射鏡的角度以調(diào)整到所需波長(zhǎng)的激光出光外，還要結(jié)合顯示屏上的光譜曲線使激光的強(qiáng)度輸出為最大。

　　液流速度：可通過(guò)操作臺(tái)數(shù)字顯示監(jiān)督，調(diào)節(jié)　氣體壓力大小以獲得穩(wěn)定的液流速度。

　　測(cè)量區(qū)光路調(diào)節(jié)　：這是調(diào)試工作的關(guān)鍵。需要保證在測(cè)量區(qū)的液流、激光束、90散射測(cè)量光電系統(tǒng)垂直正交，而且交點(diǎn)較小。一般可在用標(biāo)準(zhǔn)熒光微球等校準(zhǔn)中完成。

　　流式細(xì)胞術(shù)中所測(cè)得的量是相對(duì)值，因此需要在使用前或使用中對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行校準(zhǔn)或標(biāo)定，這樣才能通過(guò)相對(duì)測(cè)量獲得絕對(duì)的意義。因而FCM中的校準(zhǔn)具有雙重功能：儀器的準(zhǔn)直調(diào)整和定量標(biāo)度。標(biāo)準(zhǔn)樣品應(yīng)該穩(wěn)定，有形成份形狀應(yīng)是大小比較一致球形，樣品分散性能良好，且經(jīng)濟(jì)、容易獲得。常用標(biāo)準(zhǔn)熒光微球作為非生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)樣品，雞血紅細(xì)胞做為生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)樣品。微球用樹(shù)脂材料制作，或標(biāo)有熒光素，或不標(biāo)記熒光素。所用的雞血紅細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)樣品制作過(guò)程昭下：取3.8%枸櫞酸或肝素抗凝的雞血（抗凝劑：雞血=1：4），經(jīng)PBS清洗3次，再用5～10ml的1.0%戊二醛與清洗后的雞紅細(xì)胞混合，室溫下振蕩醛化24h，最后經(jīng)PBS再清洗，貯4℃冰箱中備用。需要指出的是因?yàn)槲唇?jīng)熒光染色，所測(cè)光信號(hào)為雞血紅蛋白的自發(fā)熒光。

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