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722型分光光度計(jì)的原理及使用方法

閱讀:5617        發(fā)布時(shí)間:2015-9-29

一、 測量原理                

分光光度法測量的理論依據(jù)是伯郎—比耳定律:當(dāng)容液中的物質(zhì)在光的照射和激發(fā)下,產(chǎn)生了對(duì)光吸收的效應(yīng)。但物質(zhì)對(duì)光的吸收是有選擇性的,各種不同的物質(zhì)都有其各自的吸收光譜。所以根據(jù)定律當(dāng)一束單色光通過一定濃度范圍的稀有色溶液時(shí),溶液對(duì)光的吸收程度A與溶液的濃度cg/l)或液層厚度b(cm)成正比。其定律表達(dá)式A=abca是比例系數(shù))。當(dāng)c的單位為mol/l時(shí),比例系數(shù)用ε表示,則A=εbc稱為摩爾吸光系數(shù)。其單位為L·mol-1·cm-1它是有色物質(zhì)在一定波長下的特征常數(shù)。T(透光率)=I/I0A(吸光度)= -lgTA=K·C·L(比色皿的厚度)測定時(shí),入射光I,吸光系數(shù)和溶液的光徑長度不變時(shí),透過光是根據(jù)溶液的濃度而變化的,即“K"為常數(shù)。比色皿厚度一定,“L"、“I0"也一定。只要測出A即可算出“C"。        《分光光度計(jì)的表頭上,一行是透光率,一行是吸光度?!?/span>       

二、 722型分光光度計(jì)的使用        

1、將靈敏度旋鈕調(diào)“1"檔(信號(hào)放大倍率小)。        

2、開啟電源,指示燈亮 ,選擇開關(guān)置于“T",波長調(diào)到測試用波長。儀器預(yù)熱20分鐘。          

3、打開試樣室(光門自動(dòng)關(guān)閉),調(diào)節(jié)透光率零點(diǎn)旋鈕,使數(shù)字顯示為000.0。(調(diào)節(jié)100%T旋鈕),蓋上試樣室蓋,將比色皿架處于蒸餾水校正位置,使光電管受光,調(diào)節(jié)透光率100%旋鈕使數(shù)字顯示100.0。如顯示不到100.0,則可適當(dāng)增加微電流放大的倍數(shù)。(增加靈敏度的檔數(shù)同時(shí)應(yīng)重復(fù)(3)調(diào)節(jié)儀器透光率的“0"位)但盡量使倍率置于低檔使用。這樣儀器會(huì)有更高的穩(wěn)定性。         

4、預(yù)熱后,按(3)連續(xù)幾次調(diào)整透光率的“0"位和“100%"的位置,待穩(wěn)定后儀器可進(jìn)行測定工作。      

三、 吸光度“A"的測量        

將選擇開關(guān)置于A 。調(diào)節(jié)吸光度調(diào)零旋鈕,使得數(shù)字顯示為零,然后將被測樣品移入光路,顯示值即為被測樣品的吸光度值。       

四、 濃度c的測量        

將選擇開關(guān)由“A"旋“C"將已標(biāo)定濃度的樣品放入光路,調(diào)節(jié)濃度旋鈕,使得數(shù)字顯示為標(biāo)定值,將被測樣品放入光路即可讀出被測樣品的濃度值。     

注意事項(xiàng):       

1、測量完畢,速將暗盒蓋打開,關(guān)閉電源開關(guān),將靈敏度旋鈕調(diào)低檔,取出比色皿,將裝有硅膠的干燥劑袋放入暗盒內(nèi),關(guān)上蓋子,將比色皿中的溶液倒入燒杯中,用蒸餾水洗凈后放回比色皿盒內(nèi)。

2、每臺(tái)儀器所配套的比色皿不可與其它儀器上的表面皿單個(gè)調(diào)換。 

使用方法  

1)預(yù)熱儀器  將選擇開關(guān)置于“T",打開電源開關(guān),使儀器預(yù)熱20分鐘。為了防止光電管疲勞,不要連續(xù)光照,預(yù)熱儀器時(shí)和不測定時(shí)應(yīng)將試樣室蓋打開,使光路切斷。  

2)選定波長  根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求,轉(zhuǎn)動(dòng)波長手輪,調(diào)所需要的單色波長。  

3)固定靈敏度檔  在能使空白溶液很好地調(diào)到“100%"的情況下,盡可能采用靈敏度較低的擋,使用時(shí),先調(diào)到“1"擋,靈敏度不夠時(shí)再逐漸升高。但換擋改變靈敏度后,須重新校正“0%"和“100%"。選好的靈敏度,實(shí)驗(yàn)過程中不要再變動(dòng)。  

4)調(diào)節(jié)T=0%  輕輕旋動(dòng)“0%"旋鈕,使數(shù)字顯示為“00.0",(此時(shí)試樣室是打開的)。  

5)調(diào)節(jié)T=100%  將盛蒸餾水(或空白溶液,或純?nèi)軇┑谋壬蠓湃氡壬笞苤械母駜?nèi),并對(duì)準(zhǔn)光路,把試樣室蓋子輕輕蓋上,調(diào)節(jié)透過率“100%"旋鈕,使數(shù)字顯示正好為“100.0"。  

6)吸光度的測定  將選擇開關(guān)置于“A",蓋上試樣室蓋子,將空白液置于光路中,調(diào)節(jié)吸光度調(diào)節(jié)旋鈕,使數(shù)字顯示為“.000"。將盛有待測溶液的比色皿放入比色皿座架中的其它格內(nèi),蓋上試樣室蓋,輕輕拉動(dòng)試樣架拉手,使待測溶液進(jìn)入光路,此時(shí)數(shù)字顯示值即為該待測溶液的吸光度值。讀數(shù)后,打開試樣室蓋,切斷光路。   重復(fù)上述測定操作1-2次,讀取相應(yīng)的吸光度值,取平均值。  

7)濃度的測定  選擇開關(guān)由“A"旋置“C",將已標(biāo)定濃度的樣品放入光路,調(diào)節(jié)濃度旋鈕,使得數(shù)字顯示為標(biāo)定值,將被測樣品放入光路,此時(shí)數(shù)字顯示值即為該待測溶液的濃度值。  

8)關(guān)機(jī)  實(shí)驗(yàn)完畢,切斷電源,將比色皿取出洗凈,并將比色皿座架用軟紙擦凈。

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