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脫酰胺作用-蛋白質(zhì)和多肽反相HPLC分析和純化指南蛋白質(zhì)在高溫或高pH值下會降解。在脅迫條件下，有可能發(fā)生的化學(xué)降解是酰胺側(cè)鏈上的天冬酰胺轉(zhuǎn)變?yōu)樘於彼峄虍愄於彼幔▓D37)。天冬酰胺脫去酰氨基時，許多蛋白都會失去生物活性，但也有部分蛋白的生物活性不受影響。即使脫酰胺作用不造成生物活性的減弱，脫酰胺作用也是蛋白接觸不利條件的指示。特定天冬酰胺殘基脫酰胺的可能性取決于其在蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)中的位置。只有那些與溶劑接觸表面接近的天冬酰胺殘基才會發(fā)生脫酰胺作用。相鄰的氨基酸殘基同樣影響脫酰胺作用的可能性。
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迷你電泳儀采用內(nèi)置直流電源，可直接使用AC100~110V或AC200~240V(隨機配備電源變壓器)。蓋子和移膠板均為PC塑料，耐腐蝕，強度高；鉑金電極，使用壽命長。整個儀器體積小、重量輕，攜帶方便，操作簡便。迷你電泳儀廣泛應(yīng)用于生化領(lǐng)域，適合教學(xué)、科研、食品、醫(yī)療等行業(yè)。水平電泳主要用來進行核酸的分離和檢測，是分子生物學(xué)研究中常用的實驗方法之一。迷你電泳儀的電源裝置設(shè)計*――直接插插入電泳槽，無需連線。安全的蓋子設(shè)計在電源的傍邊。當蓋子打開時，會自動切斷電源，因為電源部分有光敏元件。迷你電泳
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蛋白質(zhì)氧化-蛋白質(zhì)和多肽反相HPLC分析和純化指南在氧化環(huán)境條件下，盡管蛋白質(zhì)的幾個氨基酸都可能受影響，但有可能被氧化的氨基酸是甲硫氨酸；甲硫氨酸可被氧化成甲硫氨酸亞砜（圖34）。對甲硫氨酸殘基的氧化取決于其在蛋白質(zhì)中的位置。埋藏在蛋白質(zhì)內(nèi)部的甲硫氨酸不可能被氧化。接近表面且與溶劑接觸的甲硫氨酸側(cè)鏈有可能被氧化。氧化條件包括熱、過渡金屬的存在以及溶液中氧氣的存在。同脫酰胺作用一樣，甲硫氨酸的氧化可能導(dǎo)致生物活性的喪失或減弱，或者，在一些情況下對生物活性無影響。這取決于甲硫氨酸在蛋白質(zhì)中的位置。但
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肽圖分析法-蛋白質(zhì)和多肽反相HPLC分析和純化指南反相液相色譜已成為蛋白質(zhì)分析和表征的標準方法，尤其是治療性藥物的分析和表征。反相色譜分析法分辨率高，檢測靈敏度好，能夠提供大量關(guān)于蛋白質(zhì)的信息。有些時候，蛋白質(zhì)作為完整的分子分析，但更多的時候采用蛋白水解酶作用于特殊的氨基酸殘基將碳骨架斷開，從而將蛋白質(zhì)裂解成小片段。隨后用反相液相色譜法對裂解產(chǎn)生的肽段進行分析。該技術(shù)叫作肽圖分析，是一種標準的蛋白質(zhì)分析方法。通過反相色譜分析蛋白質(zhì)裂解后的肽段能夠獲得蛋白質(zhì)的大量信息。通過比較表達蛋白與參照標準蛋
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反相液相色譜和質(zhì)譜（MS）的聯(lián)用為蛋白質(zhì)/多肽分析提供了強大的工具。20世紀80年代，約翰·貝內(nèi)特·芬恩和他的同事們開發(fā)了電噴霧離子源，使質(zhì)譜與反相液相色譜得以聯(lián)用。采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用的好處包括：質(zhì)譜是非常靈敏的檢測技術(shù)。質(zhì)譜可以提供所分離多肽/蛋白質(zhì)的分子量。質(zhì)譜可利用分子量特異性檢測蛋白質(zhì)。片段信息有助于確認多肽。質(zhì)譜基于電荷和質(zhì)量進行分離和測定，因此，與基于疏水性分離的反相色譜“正交”。液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用廣泛用于肽圖的分析，提供了一種正交檢測肽法（參考文獻15）。如圖26所示，總離子質(zhì)
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蛋白質(zhì)/多肽液相分析中的流動相選擇有機溶劑可將吸附在疏水界面的蛋白質(zhì)洗脫（圖14）。在梯度洗脫期間，當有機溶劑量達到針對每一蛋白質(zhì)的特定濃度時，蛋白質(zhì)就會從疏水界面上解吸，繼續(xù)順著柱向下，從而從柱中洗脫。圖14.當有機改性劑的濃度達到特定值時，蛋白質(zhì)從疏水界面洗脫。乙腈。在多肽的反相色譜分離時常用的有機溶劑為乙腈。為什么選擇乙腈？乙腈易揮發(fā)，易從樣品中去除。乙腈黏度低，柱壓低。乙腈的紫外吸收截止波長較短。乙腈長期用于分離應(yīng)用。異丙醇。異丙醇在多肽的色譜分離中具有重要作用。盡管異丙醇黏度大（會增大
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蛋白質(zhì)/多肽液相分析中的流動相選擇有機溶劑可將吸附在疏水界面的蛋白質(zhì)洗脫（圖14）。在梯度洗脫期間，當有機溶劑量達到針對每一蛋白質(zhì)的特定濃度時，蛋白質(zhì)就會從疏水界面上解吸，繼續(xù)順著柱向下，從而從柱中洗脫。圖14.當有機改性劑的濃度達到特定值時，蛋白質(zhì)從疏水界面洗脫。乙腈。在多肽的反相色譜分離時常用的有機溶劑為乙腈。為什么選擇乙腈？乙腈易揮發(fā)，易從樣品中去除。乙腈黏度低，柱壓低。乙腈的紫外吸收截止波長較短。乙腈長期用于分離應(yīng)用。異丙醇。異丙醇在多肽的色譜分離中具有重要作用。盡管異丙醇黏度大（會增大
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選擇合適的色譜柱微粒。通過與柱內(nèi)填充微粒疏水表面的相互作用實現(xiàn)蛋白質(zhì)與多肽的分離。柱內(nèi)填充粒通常以硅膠為基礎(chǔ)，這是因為硅膠的穩(wěn)定性高，能夠在大多數(shù)溶劑條件下（除了pH大于6.5的情況）保持穩(wěn)定，此外，硅膠可以形成各種大小的具有不同直徑的多孔球形顆粒。硅膠純度。液相色譜柱所用硅膠填料的純度對分離性能至關(guān)重要。金屬離子雜質(zhì)會導(dǎo)致峰拖尾和分辨率下降，如圖7A所示（0.01%和0.005%的TFA）。含金屬離子雜質(zhì)（圖7A）的硅膠需要采用高濃度離子對試劑（如三氟yi酸（TFA））維持良好的峰形。圖7.硅
