真菌/酵母細胞內氧化應激活性氧初級熒光測定試劑盒產品說明書(中文版)
主要用途
真菌/酵母細胞內氧化應激活性氧初級熒光測定試劑是一種旨在通過透膜熒光染色劑二氯熒光乙酰乙酸鹽,在細胞氧化條件下,產生熒光,來定量檢測細胞內活性氧族的生成和增加的而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種實驗用真菌/酵母菌株細胞內氧化應激活性氧的分析??梢员挥糜诩毎蛲?、信號傳遞、衰老和代謝等的研究。產品嚴格無菌,即到即用,操作簡易,活體檢測,性能穩(wěn)定,熒光清晰。
技術背景
真菌/酵母細胞是一種低等單細胞真核生物,具有細胞生長快,易于培養(yǎng),遺傳操作簡單明了等原核生物的特點。作為模式生物,它具有比較完備的基因表達調控機制和表達產物的加工修飾能力,在分子遺傳學方面認識早,作為外源基因表達的細胞宿主。超氧自由基陰離子(superoxide radical;O2-)、過氧化氫(hydrogen peroxide;H2O2)、羥自由基或氫氧基(hydroxyl radical;OH-)、過氧化基(peroxyl radical;ROO-)、氫過氧自由基(hydroperoxyl;HOO)、烷氧自由基(alcoxyl radical)、氮氧基(nitric Oxide;NO-)、過氧亞硝基陰離子(peroxynitrite anion;ONOO-)次氯酸(hypochlorous acid;HOCl)、半醌自由基(semiquinone radical)、單線態(tài)氧氣(singlet oxygen)等細胞內活性氧族(Reactive Oxygen Species;ROS)的產生和增多,將導致細胞衰老或凋亡。2',7'-二氯熒光乙酰乙酸鹽(2',7'-dichlorofluorescein diacetate,DCFH-DA)一種*自由通過細胞膜的染色劑。一旦被過氧化氫、過氧化基、過氧亞硝基陰離子等氧化,便產生熒光。據此測定細胞內活性氧族的濃度。據此測定細胞內活性氧族的濃度。
產品內容
清理液(Reagent A) 毫升
染色液(Reagent B) 微升
稀釋液(Reagent C) 毫升
溶解液(Reagent D) 毫升
產品說明書 1份
保存方式
保存染色液(Reagent B)在-20℃冰箱里,嚴格避免光照;其余的保存在4℃冰箱里,有效保證6月
用戶自備
1.5毫升離心管:用于真菌/酵母染色的容器
載玻片:用于染色觀察
微型臺式離心機:用于沉淀真菌/酵母細胞
培養(yǎng)箱或恒溫水槽:用于染色孵育
比色皿:用于熒光定量分析
(共聚焦)熒光顯微鏡:用于細胞熒光分析
細胞流式儀:用于細胞熒光分析
熒光分光光度儀:用于細胞熒光定量分析
實驗步驟
實驗開始前,將-20℃冰箱里的試劑盒中的染色液(Reagent B)置入冰槽里融化。然后移出xx微升染色液(Reagent B)到新的1.5毫升離心管,加入xx微升稀釋液(Reagent C),混勻后,標記為染色工作液,置入冰槽里。然后進行下列操作。
波峰右移,表明活性氧族(ROS)含量高
1)移取5微升上述細胞懸液到載波片上,蓋上蓋玻片
2)激發(fā)波長490nm,散發(fā)波長530nm――
綠色熒光增強,表明活性氧族(ROS)含量高
1)移取500微升上述細胞懸液到1毫升比色杯
2)加入xx微升溶解液(Reagent D)
3)上下傾倒混勻數(shù)次
4)室溫下,靜置15分鐘,避免光照
5)放進熒光分光光度儀:激發(fā)波長490nm,散發(fā)波長530nm――
RFU增高,表明活性氧族(ROS)含量高
注意事項
質量標準
使用承諾
秉著“信譽至上、客戶滿意、質量承諾”的宗旨為我們的用戶提供產品和服務。用戶收到貨后,應按照產品說明書上的規(guī)定妥善保管并在有效期內使用。我們的產品在銷售前已作嚴格的質量鑒定,保證說明書所述的使用效果。在貨到后10天內若發(fā)現(xiàn)確屬本產品的質量問題,請立即以書面形式(實驗報告)與本公司聯(lián)系,并將該產品退回,經檢驗確系產品質量所致,本公司負責更換產品。如系使用者錯誤操作所致,本公司不承擔由此造成的損失。
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