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植物α-淀粉酶(α-amylase,α-AL)試劑盒說明書

時間:2019/12/3閱讀:1487
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        植物α-淀粉酶(α-amylase,α-AL)試劑盒說明書

可見分光光度法   規(guī)格:50管/24樣

產(chǎn)品內(nèi)容:

試劑一:25mL×1 瓶,常溫保存,若有黃色晶體析出,需加熱溶解后再用;

試劑二:20mL×1 瓶,4℃保存。

產(chǎn)品簡介:

淀粉酶負(fù)責(zé)水解淀粉,包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)可隨機地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷鍵,生成葡萄糖、麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原糖,同時使淀粉的粘度降低,因此又稱為液化酶。

還原糖還原3,5-二硝基水楊酸生成棕紅色物質(zhì)。β-淀粉酶不耐熱,在70℃鈍化15min,從而測定α-淀粉酶活性。

試驗中所需的儀器和試劑:

可見分光光度計、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、玻璃比色皿、研缽和蒸餾水。

操作步驟:

一、粗酶液提取:

稱取0.1~0.2g 樣本(建議稱取約0.1g 樣本),加1 mL 蒸餾水勻漿;將勻漿倒入離心管中,在室溫下放置提取15min,每隔5min 振蕩1 次,使其充分提取;3000g25℃離心10min,吸取上清液并且加蒸餾水定容至10 mL,搖勻,即為淀粉酶原液。

  • 操作步驟和加樣表(在1.5mLEP 管中依次加入下列試劑):

分光光度計預(yù)熱30min 以上,調(diào)節(jié)波長到540 nm,蒸餾水調(diào)零。

1、β-淀粉酶滅活:

試劑(μL

對照管

測定管

α-淀粉酶原液

250

250

70℃水浴15min 左右,冷卻

2、加入試劑一并且保溫:

試劑一

500

 

將以上對照管、測定管和試劑二置于40℃恒溫水浴中保溫10min左右。

3、準(zhǔn)確反應(yīng)5min

試劑二

250

250

40℃恒溫水浴中準(zhǔn)確保溫5min

4、加入試劑一,并且混勻

試劑一

 

500

混勻,95℃水浴5min,冷卻,540nm 處讀取對照管和測定管吸光度,計算ΔA=A 測定管-A 對照管。

三、α-淀粉酶活性計算:

1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定回歸曲線為y=3.7215x -0.1778; x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y 為吸光值。

2α-淀粉酶活性

1)按照樣本質(zhì)量計算

單位定義:每g 組織每分鐘催化產(chǎn)生1mg 還原糖定義為1 個酶活力單位。

α- 淀粉酶活性(mg/min/g 鮮重)=[(ΔA0.1778)÷3.7215×V 反總]÷(W×V ÷V 樣總)÷T

=1.075×(ΔA0.1778)÷W

2)按照蛋白質(zhì)含量計算

單位定義:每mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1mg 還原糖定義為1 個酶活性單位。

α-淀粉酶活性(mg/min/mg prot)= [(ΔA0.1778)÷3.7215×V 反總V ×Cpr÷T

=0.1075×(ΔA0.022) ÷Cpr

V 反總:反應(yīng)體系總體積,0.5mLV 樣:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.25 mLV 樣總:提取液總體積,10 mL; Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時間,5min

 

 

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