產(chǎn)品名稱：

通用名稱：新型冠狀病毒（2019-nCoV）人 IgG 檢測（ELISA）試劑盒

英文名稱：Diagnostic kit for human IgG detection of 2019-nCoV (ELISA)

試劑盒簡介：

 本試劑盒以純化的新型冠狀病毒（2019-nCoV）重組蛋白包被酶標(biāo)反應(yīng)板，以 HRP 標(biāo)記的小鼠抗人 IgG1單抗為診斷二抗，構(gòu)建間接法檢測體系，通過對病人康復(fù)期血清中病毒特異性 IgG 的定性檢測，用于現(xiàn)癥病人和既往感染的輔助診斷，亦可通過對病人血清進(jìn)行稀釋測定抗體滴度。試劑盒用途：

1. 新型冠狀病毒（2019-nCoV）病人的血清學(xué)輔助診斷。

2. 新型冠狀病毒（2019-nCoV）流行病學(xué)調(diào)查。

所需主要儀器：帶 450nm 波長酶標(biāo)檢測儀、洗板機(jī)。

試劑盒組成：

組 份                                               規(guī) 格                 數(shù) 量              組 份          規(guī) 格         數(shù) 量
包被有重組抗原的酶標(biāo)板                96 孔（12×8）      1 塊            顯色液 A        7ml          1 瓶
HRP 標(biāo)記的抗人 IgG1 單抗工作液      11ml                 1 瓶             顯色液 B      7ml          1 瓶
樣品稀釋液                                         11ml                 1 瓶             終止液          7ml         1 瓶
20 倍濃縮洗液（用前稀釋）               50ml                  1 瓶              封板膜            3 張
陽性對照                                            0.2ml                 1 瓶             試劑盒使用說明書 1 份
陰性對照                                            0.2ml                 1 瓶

操作步驟：

1. 根據(jù)樣品數(shù)量取出一定量的預(yù)包被酶標(biāo)板并平衡至室溫，每次實(shí)驗(yàn)設(shè)陰、陽和空白復(fù)孔對照；

2. 首先向板中加入 100μl/管樣品稀釋液，然后向其中加入 1μl 的待測血清，向陰性對照孔加入 1μl 陰性血

清；

3. 空白對照加樣品稀釋液 100μl，陽性對照孔加入陽性血清 100μl；

4. 將酶標(biāo)板用封板膜封閉，置 37℃孵箱中孵育 30 分鐘；

5. 將 20X 濃縮洗滌液用純凈水稀釋 20 倍（V:V=1:19）為洗滌應(yīng)用液，注意 4℃儲存易出現(xiàn)結(jié)晶，取出待

溶解后再配制成應(yīng)用液；

6. 取出酶標(biāo)板置于洗板機(jī)上用洗滌應(yīng)用液洗滌（或者用洗瓶手工洗滌）5 次后，甩干孔內(nèi)殘留液或倒扣酶

標(biāo)反應(yīng)板在吸水紙上拍去孔內(nèi)殘留液；

7. 于各孔中加入 HRP 標(biāo)記的抗人 IgG1 單抗工作液 100μl/孔，置 37℃孵箱中孵育 30 分鐘；

8. 重復(fù)方法 7；

9. 將顯色液 A、B 液按 1:1 混合后取混合顯色液每孔加 100μl，輕拍酶標(biāo)反應(yīng)板，混勻后置室溫 5 分鐘（要

求計(jì)時(shí)準(zhǔn)確！避光）；

10. 于各孔中加入終止液 50μl/孔，輕拍混勻；

11. 將酶標(biāo)板置于酶標(biāo)儀 450nm 波長下，測定各孔光吸收 OD 值。

結(jié)果判定：

1. 臨界值（Cutoff）計(jì)算：陰性對照復(fù)孔 OD 平均值應(yīng)≦0.1。Cutoff﹦0.748×陰性對照復(fù)孔 OD 平均值+0.146，若陰性對照 OD 值平均值為 0，則陰性對照按照 0.05 計(jì)算 Cutoff 值。

2. 結(jié)果判斷：待檢標(biāo)本 OD 值＞Cutoff 為陽性，待檢標(biāo)本 OD 值＜Cutoff 為陰性。當(dāng)標(biāo)本 OD 值介于陰性灰區(qū)下沿（其值可按照該公式計(jì)算：0.893×陰性對照復(fù)孔 OD 平均值+0.113）與 Cutoff之間時(shí)，該標(biāo)本為陰性可疑；反之當(dāng)標(biāo)本 OD 值介于 Cutoff 與陽性灰區(qū)上沿（其值可按照該公式計(jì)算：0.401×陰性對照復(fù)孔 OD 平均值+0.248）之間時(shí)，該標(biāo)本為陽性可疑。

注意事項(xiàng)：

1. 診斷試劑盒 4℃冷藏保存，不得長期置于室溫環(huán)境中。試劑盒打開包裝后，應(yīng)盡快使用，若分多次使用，剩余試劑應(yīng)置于 2~8℃下保存；

2. 注意加樣量的準(zhǔn)確性，減少操作引起的結(jié)果誤差；

3. 嚴(yán)格掌握每次實(shí)驗(yàn)的時(shí)間、溫度的一致性；

4. 為防止邊緣效應(yīng)的發(fā)生，整板檢測時(shí)要把與板框直接接觸的反應(yīng)孔空置；樣本數(shù)量較少時(shí)，反應(yīng)板條

左右兩側(cè)分別放置一條廢棄的板條；

5. 洗板機(jī)設(shè)置的高度不得大于孔深度，以免造成假陽性；

6. 臨床高度疑似新型冠狀病毒（2019-nCoV），而本試劑盒對血清樣品的檢測結(jié)果為陰性，建議 7 天后對

患者再次采血檢測，若仍然為陰性，即可判為無感染；

7. 檢測結(jié)果應(yīng)結(jié)合病人臨床癥狀和流行病學(xué)史做出綜合判斷，應(yīng)注意由于感染 OC43 型和 HKU1 等冠狀病

毒而造成的假陽性果；

8. 使用前請閱讀說明書，嚴(yán)格按照說明書操作，不同批號試劑盒中各組分不得混用。

本品僅供科研。保存條件：2~8℃下保存

有 效 期：6 個(gè)月