ABC-ELISA免疫標記技術(shù)

借助親和素之間*的親和力，至少要比抗原和抗體之間的結(jié)合高1萬被，且兩者結(jié)合迅速而穩(wěn)定，故用于免疫標記技術(shù)中，可提高檢測靈敏度，并可縮短反應(yīng)時間。在包被寄生蟲抗原的反應(yīng)板凹孔中，加寄生蟲感染者血清后，即形成抗原-抗體復合物，再加生物素標記的羊抗人IgG(Biotin-IgG),即與復合物相結(jié)合，再加ABC復合物（親和素-生物素-酶結(jié)合物），即可biotin-IgG相結(jié)合，zui后用相應(yīng)底物進形顯色反應(yīng)后，用分光光度計測定消光值，即可判讀反應(yīng)結(jié)果。

抗原制備 參考免疫酶測定法部分的抗原制備方法。

生物素標記羊抗人IgG 羊抗人IgG 血清經(jīng)50%和33%飽和硫酸銨各鹽析一次，收集γ球蛋白部分，透析后測定蛋白質(zhì)含量。林用錢，用0.1mol/L NaHCO3配成1mg/ml 濃度。將生物素用N-羥基丁二酰亞胺進行酯化反應(yīng)，使稱為酯化生物素，然后用二甲基甲酰胺配成10mg/ml濃度以每mg抗球蛋白加0.2-0.4mg酯化生物素的比例，將酯化生物素二甲基甲酰胺溶液加入于羊抗IgG中，震蕩10min，置于是穩(wěn)中3-4h，然后用PBS透析24h，多次換液后，即為生物素標記物，保存?zhèn)溆谩?/span>

生物素標記辣根過氧化物酶  案上訴生物素標記羊抗人IgG方法，制備生物素標記沒

ABC溶液配制 在圖文-PBS中，分別加入avidin和HRP-Bio,使各自的zui終濃度為8-12ug/ml和3-4ug/ml，置室溫中混勻20-30min，即可應(yīng)用，通常在臨用前30min配制。

在以包被抗原的40孔反應(yīng)板凹孔中，加待測血清，如ELISA法孵育、洗滌后，加biotin-IgG如賞罰孵育，洗滌、再加ABC洗滌，于37℃經(jīng)15min，洗滌后加底物（鄰苯二胺OPD),置37℃經(jīng)10-15min，zui后用2mol/L H2SO4終止反應(yīng)，用酶標檢測儀測定OD值，檢測時每一樣本做2分，求得均值。

以健康人測得的OD均值，加2個標準差作為標準值(N0.求每一受檢驗本的OD值（P)與N值的比值。以P/N≥1.5-2.0，作為陽性，否則為陰性。

?返回zui上層