 |
上海申知心生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： 高血脂癥動物模型,心血管疾病動物模型,缺血性心臟病動物模型 |
11
聯(lián)系電話
|
上海申知心生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： 高血脂癥動物模型,心血管疾病動物模型,缺血性心臟病動物模型 |
聯(lián)系電話
2017-8-24 閱讀(4054)
(1)濃鹽法
利用RNP和DNP在電解溶液中溶解度不同，將二者分離，常用的方法是用1M Nacl抽提,得到的DNP粘液與含有少量辛醇的CCL3一起搖蕩,使乳化,再離心除去蛋白質(zhì),此時蛋白質(zhì)凝膠停留在水相及CCL3相中間，而DNA位于上層水相中,用2倍體積95％乙醇可將DNA 鈉鹽沉淀出來.
也可用0.15 MNaCL液反復(fù)洗滌細胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脫氧核糖蛋白,再按CCL3---異醇法除去蛋白.
兩種方法比較,后種方法使核酸降解可能少一些.
以稀鹽酸溶液提取DNA 時,加入適量去污劑,如SDS可有助于蛋白質(zhì)與DNA 的分離。在提取過程中為抑制組織中的DNase對DNA 的降解作用,在氯化鈉Nacl溶液中加入檸檬酸鈉作為金屬離子的烙合劑.通常用.15MNaCL,0.015M檸檬鈉,并稱SSC溶液,提取DNA.
（2）陰離子去污劑法:
用SDS或二甲苯酸鈉等去污劑使蛋白質(zhì)變性,可以直接從生物材料中提取DNA .由于細胞中DNA與蛋白質(zhì)之間常借靜電引力或配位鍵結(jié)合,因為陰離子去污劑能夠破壞這種價鍵,所以常用陰離子去污劑提取DNA.
（3）苯酚抽提法:
苯酚作為蛋白變性劑,同時抑制了DNase的降解作用.用苯酚處理勻漿液時,由于蛋白與DNA 聯(lián)結(jié)鍵已斷,蛋白分子表面又含有很多極性基團與苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。離心分層后取出水層，多次重復(fù)操作，再
合并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性質(zhì)，用乙醇沉淀DNA 。此時DNA是十分粘稠的物質(zhì)，可用玻璃漫漫繞成一團，取出。此法的特點是使提取的DNA保持天然狀態(tài) .
（4）水抽提法:
利用核酸溶解于水的性質(zhì),將組織細胞破碎后,用低鹽溶液除去RNA，然后將沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中,離心后收集上清液.在上清中加入固體氯化鈉調(diào)節(jié)至2.6M.加入2倍體積95％乙醇,立即用攪拌法攪出.然后分別用66％ ?80％和95％乙醇以及丙銅洗滌
