 |
上海申知心生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 高血脂癥動(dòng)物模型,心血管疾病動(dòng)物模型,缺血性心臟病動(dòng)物模型 |
會(huì)員.png)
11
聯(lián)系電話
|
上海申知心生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 高血脂癥動(dòng)物模型,心血管疾病動(dòng)物模型,缺血性心臟病動(dòng)物模型 |
聯(lián)系電話
2017-11-23 閱讀(13756)
大家一直都覺(jué)得ceRNA的研究，就是研究LncRNA的簡(jiǎn)便機(jī)制了是吧。因?yàn)槎疾挥脕?lái)論證啥，就直接證明LncRNA和對(duì)應(yīng)的mRNA能同時(shí)結(jié)合miRNA就行了，不是么？
其實(shí)，也不全是，當(dāng)然，要是把ceRNA作為低分的LncRNA研究機(jī)制的話，那簡(jiǎn)單的就是做一個(gè)Luciferase實(shí)驗(yàn)：
也就是利用Luciferase的3'UTR結(jié)合miRNA，來(lái)驗(yàn)證一下lncRNA和mRNA是不是分別能和miRNA結(jié)合。這個(gè)都是研究miRNA的基本套路。
但LncRNA并不會(huì)表達(dá)蛋白，所以用Luciferase的方法，并不靠譜。所以就需要通過(guò)別的實(shí)驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證。
用于ceRNA研究的常用的方法還有MS2-RIP,就是體外過(guò)表達(dá)LncRNA的時(shí)候，在末端接上一個(gè)MS2蛋白結(jié)合的串聯(lián)序列，然后用MS2蛋白用RNA免疫共沉淀（RIP）的方法拉下來(lái)。當(dāng)然LncRNA上會(huì)帶有結(jié)合的miRNA，把拉下來(lái)的miRNA做real-time PCR就可以了。
當(dāng)然，類似的方法，還有用生物素標(biāo)記LncRNA的RIP，同樣也是將LncRNA拉下來(lái)，然后再通過(guò)Real-time PCR來(lái)看結(jié)合上去的miRNA的表達(dá)。
其實(shí)這兩種方法，都有異曲同工的作用，就是驗(yàn)證LncRNA與miRNA的結(jié)合。但是這兩種方法，其實(shí)也不能解釋mRNA是否能與LncRNA形成ceRNA的關(guān)系。于是就產(chǎn)生了這樣的方法：
由于miRNA形成RISC復(fù)合體結(jié)合的時(shí)候，是被AGO蛋白包裹的，主要是AGO2。也就是說(shuō)，拉下AGO2蛋白，就能拉下結(jié)合在上面的miRNA，這樣RISC結(jié)合的LncRNA以及mRNA也會(huì)被拉下來(lái)。這就是AGO2-RIP，也就是通過(guò)拉miRNA，來(lái)分析miRNA結(jié)合的LncRNA以及mRNA的量：
用這種方法，可以相對(duì)直接地研究ceRNA之間的關(guān)系。當(dāng)然，在較高分的ceRNA的研究中，這種方法也是被經(jīng)常用到的。
