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本期就溫度對高效液相色譜分析的影響展開說明，重點介紹柱溫和環(huán)境溫度對分析的影響。

一、柱溫對高效液相色譜分析的影響，通過范特霍夫方程來表達。

原則上，范特霍夫方程是用于計算在不同溫度下某反應平衡常數的方程：

㏑K=－△H/RT+△S/R

   K：保留因子，描述色譜柱溫度相關系數

△H：流動相和固定相之間分析物的焓變

△S：相應的熵變        

   R：相位關系的常數        T：溫度

從公式中可以看出：lnk與時間1/T之間是線性關系，實際上因物質特性、條件差異不一定出現良好相似性，在高效液相色譜檢測中柱溫的變化常常會造成某些指標不良。

案例一：柱溫對含量、分離度及理論塔板數的影響。

某公司測試果糖及葡萄糖含量，分離度及理論塔板數結果異常。

1含量結果誤差大

< 數據對比結果 >

2分離度及理論塔板數下降

< A數據 >

<B數據 >

3原因分析

糖樣要求溫度：85℃，糖類分析通常高溫會帶來高分離度，但超過90℃之后幾乎沒有變化，柱溫低于70℃對于許多糖類來說，不能提供足夠分離度。

經排查發(fā)現，柱溫箱溫度偏差較大，與實際溫度相差20度，修正柱溫后，測試正常。

二、環(huán)境溫度對高效液相色譜分析的影響，歸類來說主要包含兩個方面：其一對檢測器影響；其二對流動相影響。

案例二：室溫對基線噪音的影響；某公司測試過程中基線噪音異常變大。

設置波長接近流動相截止波長時，室溫波動超過1℃引發(fā)噪音變大。室溫穩(wěn)定后，基線正常。

案例三：某公司測試過程中保留時間異常。

室溫波動超過3℃以上會引發(fā)壓力波動，室溫穩(wěn)定后重新測試，保留時間正常。

檢查室溫變化發(fā)現，室溫波動范圍2-4度左右，柱壓隨室溫變化而變化。

以上可知，環(huán)境溫度對高效液相色譜分析的影響，主要在以下兩個方面。

① 設置波長接近流動相截止波長且室溫波動大于1℃的情況下，造成噪音過大的情況，不影響保留時間。

② 流動相不在截止波長范圍且室溫波動大于3℃以上的情況下，造成流動相溫度的變化，進而影響保留時間、基線漂移，但不影響基線噪音。

通過檢測器的原理，我們可以發(fā)現PDA、RF、RID等檢測器也易受環(huán)境溫度的影響。

四季更迭，氣溫波動。液相色譜儀使用中應關注溫度變化，從而消除溫度對分析的影響。