此產(chǎn)品僅用于科研！

本品用于分離人外周血淋巴細(xì)胞，內(nèi)毒素<0.5EU 科研級

人外周血淋巴細(xì)胞分離液說明書

【包裝規(guī)格】 200ml/瓶

【貨號】 LTS1077

【實驗前準(zhǔn)備】 A． 適用儀器 zui大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)

【檢驗方法】

全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。 首先根據(jù)樣本量大小，分以下幾種情況：

一、 使用 15ml 離心管時： 情況 A：血液樣本量小于 3ml 時，實驗方法如下：

1. 取一支 15ml 離心管，加入 3ml 分離液。

2. 用吸管小心吸取血液樣本加于分離液之液面上，400-650g，離心 20-30min（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件，血液樣本量越多，離心力越大，離心時間越長，具體離心條件需客戶自行摸索，以達(dá)到zui分離效果）。

3. 離心后，此時離心管中由上至下分為四層。*層為血漿層。第二層為環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細(xì)胞層。

4. 用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞層到另一 15ml 離心管中，向所得離心管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118），混勻細(xì)胞。

5. 250g，離心 10min。

6. 棄上清。

7. 用吸管以 5ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）重懸所得細(xì)胞。

8. 250g，離心 10min。

9. 重復(fù) 6、7、8，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞。

情況 B：血液樣本量為 3-6ml 時，實驗方法如下：

1. 取一支 15ml 離心管，先加入與血液樣本等量的分離液。

2. 用吸管小心吸取血液樣本加于分離液之液面上，450-650g，離心 20-30min（注：根據(jù)血 液樣本量確定離心條件，血液樣本量越多，離心力越大，離心時間越長，具體離心條件 需客戶自行摸索，以達(dá)到zui分離效果，但zui大離心力不超過 1200g）。

3. 離心后，此時離心管中由上至下分為四層。*層為血漿層。第二層為環(huán)狀乳白色淋巴 細(xì)胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細(xì)胞層。

4. 用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞層到另一 15ml 離心管中，向所得離心管中 加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118），混勻細(xì)胞。

5. 250g，離心 10min。

6. 棄上清。

7. 用吸管以 5ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）重懸所得細(xì)胞。

8. 250g，離心 10min。

9. 重復(fù) 6、7、8，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞。

二、 使用 50ml 離心管時：

情況 A：血液樣本量為 6-10ml 時，實驗方法如下：

1. 取一支 50ml 離心管，先加入與血液樣本等量的分離液。

2. 用吸管小心吸取血液樣本加于分離液之液面上，500-950g，離心 20-30min（注：根據(jù)血 液樣本量確定離心條件，血液樣本量越多，離心力越大，離心時間越長，具體離心條件 需客戶自行摸索，以達(dá)到zui分離效果，但zui大離心力不超過 1200g）。

3. 離心后，此時離心管中由上至下分為四層。*層為血漿層。第二層為環(huán)狀乳白色淋巴 細(xì)胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細(xì)胞層。

4. 用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞層到另一 15ml 離心管中，向所得離心管中 加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118），混勻細(xì)胞。

5. 250g，離心 10min。

6. 棄上清。

7. 用吸管以 5ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）重懸所得細(xì)胞。

8. 250g，離心 10min。

9. 重復(fù) 6、7、8，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞。

情況 B：血液樣本量為 10-20ml 時，實驗方法如下：

1. 取一支 50ml 離心管，先加入與血液樣本等量的分離液。

2. 用吸管小心吸取血液樣本加于分離液之液面上，500-1100g，離心 20-30min（注：根據(jù) 血液樣本量確定離心條件，血液樣本量越多，離心力越大，離心時間越長，具體離心條 件需客戶自行摸索，以達(dá)到zui分離效果，但zui大離心力不超過 1200g）。

3. 離心后，此時離心管中由上至下分為四層。*層為血漿層。第二層為環(huán)狀乳白色淋巴 細(xì)胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細(xì)胞層。

4. 用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞層到另一 15ml 離心管中，向所得離心管中 加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118），混勻細(xì)胞。

5. 250g，離心 10min。

6. 棄上清。

7. 用吸管以 5ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）重懸所得細(xì)胞。

8. 250g，離心 10min。

9. 重復(fù) 6、7、8，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞。

【注意事項】 1. 全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得的實驗結(jié)果， 在取血 2h 內(nèi)進(jìn)行實驗，血液存放時間越長，細(xì)胞分離效果越差。血液放置超過 6h 后分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的。

2. 本實驗不要使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應(yīng)使用無靜電、低靜電離 心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品，因為靜電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面 會變成毛面，影響細(xì)胞分離效果。

3. 吸取過多的淋巴細(xì)胞層及分離液層會導(dǎo)致分離液交界處的粒細(xì)胞被吸出從而使混雜的粒 細(xì)胞數(shù)量增加。

4. 吸取過多的淋巴細(xì)胞層上層溶液會導(dǎo)致血漿蛋白及血小板混雜。

5. 如所實驗后細(xì)胞得率或活性過低，請?zhí)旖驗笠詫で髱椭?，具體 詳見下方生產(chǎn)企業(yè)信息。

6. 當(dāng)血液樣本粘度過高需稀釋時，*稀釋方法：將血液與樣本稀釋液（產(chǎn)品編號： 2010C1119）1:1 稀釋混勻備用。注：不當(dāng)?shù)南♂尫椒〞档图?xì)胞得率及活性。如血液樣 本經(jīng)過稀釋則分離過程中需適當(dāng)降低離心力和離心時間。

【儲存條件及有效期】 18-25℃保存，有效期 2 年。本品易感染細(xì)菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟 封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。