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二手熱循環(huán)儀PCR儀的一些技術要點詳細闡述

閱讀:588        發(fā)布時間:2017-7-14
     在二手熱循環(huán)儀PCR儀設計基礎上增加熒光信號激發(fā)和采集系統(tǒng)和計算機分析處理系統(tǒng),形成了具有熒光定量PCR功能的儀器。其PCR擴增原理和普通PCR擴增原理相同,二手熱循環(huán)儀PCR儀時加入的引物是利用同位素、熒光素等進行標記,使用引物和熒光探針同時與模板特異性結合擴增。擴增的結果通過熒光信號采集系統(tǒng)實時采集信號連接輸送到計算機分析處理系統(tǒng),得出量化的實時結果輸出。
    二手熱循環(huán)儀PCR儀有單通道,雙通道和多通道之分。當只用一種熒光探針標記的時候,選用單通道;有多種熒光標記的時候使用多通道。單通道也可以檢測多熒光的標記和目的基因表達產物,因為一次只能檢測一種目的基因的擴增量,需多次擴增才能檢測完不同的目的基因片段的量。多通道利于做多重PCR,實現(xiàn)一次檢測多種目的基因的功能。
    實時熒光定量PCR儀主要應用于臨床醫(yī)學檢測、生物醫(yī)藥研發(fā)、食品行業(yè)、科研院校等。
    在二手熱循環(huán)儀PCR儀的基礎上增加一個熒光信號采集系統(tǒng)和計算機分析處理系統(tǒng),就成了熒光定量PCR儀。其PCR擴增原理和普通PCR儀擴增原理相同,只是PCR擴增時加入的引物是利用同位素、熒光素等進行標記,使用引物和熒光探針同時與模板特異性結合擴增。擴增的結果通過熒光信號采集系統(tǒng)實時采集信號連接輸送到計算機分析處理系統(tǒng)得出量化的實時結果輸出。把這PCR儀叫做實時二手熱循環(huán)儀PCR儀(qPCR儀)。熒光定量PCR儀有單通道,雙通道,和多通道。當只用一種熒光探針標記的時候,選用單通道,有多熒光標記的時候用多通道。單通道也可以檢測多熒光的標記的目的基因表達產物,因為一次只能檢測一種目的基因的擴增量,需多次擴增才能檢測完不同的目的基因片段的量。該儀器主要用于醫(yī)學臨床檢測,生物醫(yī)藥研發(fā),食品行業(yè),科研院校等機構。
    把一次PCR擴增只能運行一個特定退火溫度的二手熱循環(huán)儀PCR儀,叫傳統(tǒng)的PCR儀,也叫普通PCR儀。如果要做不同的退火溫度需要多次運行。主要是做簡單的,對目的基因退火溫度的擴增。該儀器主要應用于科研研究,教學,醫(yī)學臨床,檢驗檢疫等機構。
    把一次性二手熱循環(huán)儀PCR儀R擴增可以設置一系列不同的退火溫度條件(溫度梯度),通常有12種溫度梯度,這樣的儀器就叫梯度PCR儀。因為被擴增的不同DNA片段,其zui適退火溫度是不同的,通過設置一系列的梯度退火溫度進行擴增,從而一次性二手熱循環(huán)儀PCR儀擴增,就可以篩選出表達量高的zui適退火溫度,進行有效的擴增。主要用于研究未知DNA退火溫度的擴增,這樣節(jié)約成本的同時也節(jié)約了時間。主要用于科研,教學機構。梯度PCR儀,在不設置梯度的情況下也可以做普通PCR擴增。具有雙槽梯度的不多,領成具備此功能。

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