基因工程提供了人們改變蛋白質(zhì)性質(zhì)的機(jī)會(huì)，因而可以借此改善蛋白質(zhì)的純化特性。通過在目的DNA的3’端或5’端插入DNA序列，可以改變蛋白質(zhì)兩端的氨基酸序列，進(jìn)而作為可純化的融合蛋白。這些融合子可幫助蛋白質(zhì)形成包含體，用于穩(wěn)定蛋白質(zhì)，免受蛋白酶的攻擊，還可以賦予蛋白質(zhì)特定的純化性質(zhì)，使其適用于免疫親和、金屬螯合、離子交換、疏水色譜以及其他分離操作。此外，對(duì)于已知特性的蛋白質(zhì)，改變其中特氨基酸可引入具有特定基質(zhì)吸附親和力的片段。
市面上有兩種很常見的標(biāo)簽，分別為組氨酸標(biāo)簽和GST標(biāo)簽，這兩種標(biāo)簽可插入蛋白形成重組蛋白，月旭科技現(xiàn)有針對(duì)這兩種標(biāo)簽蛋白純化的填料可供選擇。
His-Tag（組氨酸標(biāo)簽）是重組蛋白表達(dá)zui常用的標(biāo)簽，無論表達(dá)的蛋白是可溶的或者包涵體都可以用固定金屬離子親和層析純化。6×His-tag是指六個(gè)組氨酸殘基組成的融合標(biāo)簽，可插入在目的蛋白的C末端或N末端。
純化組氨酸標(biāo)簽蛋白zui常用的配體是亞氨基二乙酸（IDA）和次氨基三乙酸（NTA），可使用月旭科技Ni Tanrose 6FF（NTA）或Ni Tanrose 6FF（IDA）來純化。
技術(shù)參數(shù)
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谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶（GST）是一種親和標(biāo)簽，用GST標(biāo)記真核蛋白可增強(qiáng)融合蛋白的溶解性。此外，帶有 GST 標(biāo)簽的蛋白可以在細(xì)菌中高水平表達(dá)，但可能會(huì)由于蛋白聚集而形成包涵體。一般將GST標(biāo)簽添加到目標(biāo)蛋白質(zhì)的N或C末端。
GST對(duì)谷胱甘肽具有很相對(duì)強(qiáng)的親和力，這意味著可以在固定的基質(zhì)（如鍵合谷胱甘肽的填料）上捕獲GST蛋白融合物。這種結(jié)合特性可用于蛋白質(zhì)純化以及通過蛋白質(zhì)的結(jié)合，來捕獲對(duì)應(yīng)的蛋白質(zhì)。因此可使用月旭科技GST Tanrose 4FF來純化GST標(biāo)簽蛋白。
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