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新買(mǎi)的氨基柱,為啥沒(méi)有舊柱子好用呢?

閱讀:1481      發(fā)布時(shí)間:2023-10-9
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新買(mǎi)的氨基柱,為啥沒(méi)有舊柱子好用呢?

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在色譜分析過(guò)程中大家可能發(fā)現(xiàn),對(duì)某些化合物而言,當(dāng)使用舊色譜柱時(shí)峰形和分離度都比較好,換新柱后會(huì)出現(xiàn)保留時(shí)間延長(zhǎng)或拖尾問(wèn)題。所謂柱子不一定新的好!越用越好用!"產(chǎn)生這種現(xiàn)象的原因是:新色譜柱填料中有很多活性位點(diǎn),對(duì)于您的樣品來(lái)說(shuō),柱子和樣品之間需要一段磨合期"。

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新柱與樣品之間的磨合期"

一般解決方案:打底進(jìn)樣,將新色譜柱填料中過(guò)多的活性位點(diǎn)占用。

具體操作:可連續(xù)進(jìn)樣5針低濃度樣品,一針接一針進(jìn)樣,不必等樣品峰出完再進(jìn)下一針;或者直接進(jìn)一針或幾針高濃度樣品,等待出峰穩(wěn)定之后再進(jìn)行分析檢測(cè)。

這種操作方法,我們且稱(chēng)之為新柱的飽和鈍化"。但這并不是萬(wàn)能的處理方式。比如:氨基柱。

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氨基柱常用于糖類(lèi)分析檢測(cè),在新柱使用初期同樣會(huì)出現(xiàn)峰保留增強(qiáng)和峰拖尾的問(wèn)題,對(duì)分析的準(zhǔn)確性、重現(xiàn)性存在較大影響。而因分析物性質(zhì)影響,打底進(jìn)樣難以達(dá)到吸附平衡,對(duì)活性位點(diǎn)的占位屏蔽作用不明顯,分析物仍易拖尾,如下圖:

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月旭Ultimate® HILIC NH2,5μm

新柱對(duì)某糖分析譜圖-處理前


對(duì)此我們考慮三乙胺常用作掃尾劑以屏蔽填料中殘余硅醇基對(duì)分析物產(chǎn)生的次級(jí)吸附作用,氨丙基鍵合相新色譜柱也可使用TEA進(jìn)行預(yù)處理。以0.5%三乙胺(用磷酸調(diào)pH2.5~3.0):乙腈(3070)為流動(dòng)相,0.5~1mL/min過(guò)渡沖柱30~60min,再使用分析所需流動(dòng)相充分平衡后進(jìn)樣。在此條件下,三乙胺極易與殘余硅醇基形成氫鍵,起到占位屏蔽作用且能夠快速達(dá)到吸附平衡,解決了新色譜柱對(duì)分析物因次級(jí)吸附造成的峰保留增強(qiáng)與峰拖尾問(wèn)題。色譜柱處理后譜圖如下:

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月旭Ultimate® HILIC NH2,5μm

新柱對(duì)某糖分析譜圖-處理后

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月旭Ultimate® XB-NH2,3μm

新柱對(duì)某糖分析譜圖-處理后


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