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美德聲嗜堿性粒細(xì)胞活化檢測(cè)試劑

美德聲提供的Flow CAST® 基于流式細(xì)胞術(shù)的嗜堿性粒細(xì)胞活化檢測(cè)試劑。

Flow CAST® 是一種體外診斷測(cè)試，用于定性評(píng)估嗜堿性粒細(xì)胞在特定過(guò)敏原刺激下的活化情況。該測(cè)試旨在輔助即時(shí)型過(guò)敏的診斷，并與其他實(shí)驗(yàn)室測(cè)試聯(lián)合使用。

適用范圍

本產(chǎn)品僅供實(shí)驗(yàn)室使用。

檢測(cè)原理

Flow CAST® 是一種嗜堿性粒細(xì)胞活化測(cè)試（BAT），通過(guò)在患者全血中體外刺激嗜堿性粒細(xì)胞，然后利用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定嗜堿性粒細(xì)胞的活化狀態(tài)，從而再現(xiàn)過(guò)敏反應(yīng)。

Flow CAST® 用于通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定患者全血樣品中的嗜堿性粒細(xì)胞活化。我們獨(dú)te的標(biāo)記物組合 – CCR3 和 CD63 – 將 CCR3 檢測(cè)嗜堿性粒細(xì)胞的簡(jiǎn)單設(shè)門特性與經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的活化標(biāo)記物 CD63 的可靠應(yīng)用合二為一。由于其簡(jiǎn)單的方案和智能標(biāo)記組合，可以在一小時(shí)內(nèi)獲得第一個(gè)結(jié)果 - 為常規(guī)實(shí)驗(yàn)室提供wan美的條件。

·       細(xì)胞染色：使用兩種熒光標(biāo)記的單克隆抗體進(jìn)行染色，抗CCR3-PE用于細(xì)胞選擇，抗CD63-FITC用于確定活化狀態(tài)。

·       細(xì)胞識(shí)別：通過(guò)CCR3陽(yáng)性/低側(cè)向散射（SSClow）門控識(shí)別嗜堿性粒細(xì)胞，并通過(guò)CD63表達(dá)評(píng)估其活化狀態(tài)。

·       結(jié)果讀取：以CD63陽(yáng)性嗜堿性粒細(xì)胞占所有嗜堿性粒細(xì)胞的百分比（%CD63）作為讀數(shù)。

結(jié)果解讀

截?cái)嘀?/span>

·       技術(shù)截?cái)嘀?/span>：5%，通過(guò)參考范圍研究確定。

·       過(guò)敏原特異性截?cái)嘀?/span>：提高特異性的截?cái)嘀担ㄔ斠?jiàn)CAST®過(guò)敏原手冊(cè)）。

臨床性能

11項(xiàng)同行評(píng)審研究證實(shí)了其在區(qū)分過(guò)敏性疾病患者和非過(guò)敏個(gè)體方面的有效性。過(guò)敏狀況通過(guò)患者的臨床病史、口服食物挑戰(zhàn)、實(shí)驗(yàn)室測(cè)試（如皮膚點(diǎn)刺試驗(yàn)和特異性IgE）或這些方法的組合進(jìn)行驗(yàn)證。

性能特征

·       嗜堿性粒細(xì)胞回收率：>500個(gè)嗜堿性粒細(xì)胞/管

·       實(shí)驗(yàn)室內(nèi)精密度：<25%變異系數(shù)（CV），根據(jù)CLSI指南EP05-A3和ISO標(biāo)準(zhǔn)15197:2013執(zhí)行

·       重復(fù)性：<25%變異系數(shù)（CV），根據(jù)CLSI指南EP05-A3和ISO標(biāo)準(zhǔn)15197:2013執(zhí)行

IgE非應(yīng)答者比例低于5%

在一項(xiàng)針對(duì)130名健康獻(xiàn)血者的研究中，只有1人對(duì)FcERI受體交聯(lián)反應(yīng)較差，非應(yīng)答率為0.77%。大多數(shù)獻(xiàn)血者（81.5%）表現(xiàn)出強(qiáng)烈反應(yīng)，活化率超過(guò)50%。

每套試劑盒的樣本數(shù)量

預(yù)分析

樣本要求

·       樣本類型：DTA全血

·       儲(chǔ)存條件：2-8°C（不可冷凍）

·       處理時(shí)間：48小時(shí)內(nèi)處理，藥物過(guò)敏原需在24小時(shí)內(nèi)處理

采集

·       使用K-EDTA靜脈穿刺管，至少裝滿一半

·       對(duì)于大多數(shù)常用的抗組胺藥，在規(guī)定濃度下未檢測(cè)到干擾，詳見(jiàn)使用說(shuō)明書(shū)（IFU）。

處理后樣本的儲(chǔ)存

按照標(biāo)準(zhǔn)協(xié)議處理的細(xì)胞已固定，固定細(xì)胞可在2-8°C下儲(chǔ)存5天以供后續(xù)獲取。

設(shè)備

·       配備488 nm（藍(lán)色）激光源的流式細(xì)胞儀，帶有PE和FITC通道的發(fā)射濾光片

·       水浴或培養(yǎng)箱（37°C）

·       離心機(jī)

CAST® 過(guò)敏原

需單獨(dú)訂購(gòu)，請(qǐng)參閱過(guò)敏原手冊(cè)

制備

·       用250μl刺激緩沖液重懸過(guò)敏原

·       每瓶過(guò)敏原最多可進(jìn)行4次刺激

·       使用新鮮復(fù)溶的過(guò)敏原進(jìn)行刺激

樣本制備布局

為每位患者準(zhǔn)備單獨(dú)的試管用于對(duì)照和待檢測(cè)的過(guò)敏原：

·       PB=患者背景

·       PC1=抗FcE（epsilon糖蛋白）RI Ab刺激對(duì)照

·       PC2=fMLOP刺激對(duì)照

·       A1-1=過(guò)敏原1稀釋度1

·       A1-2=過(guò)敏原1稀釋度2，以此類推

刺激和染色

向每個(gè)試管中加入：

1.       50 μl刺激物

2.       100 μl刺激緩沖液

3.       50 μl全血

4.       20 μl染色劑
輕輕混合并孵育

紅細(xì)胞裂解

向所有試管中加入2.0 ml預(yù)熱的（18-28°C）裂解試劑
在18-28°C下孵育5-10分鐘，并以500xg離心5分鐘
加入300 μl含固定劑的洗滌緩沖液重懸細(xì)胞沉淀
根據(jù)所使用的流式細(xì)胞儀進(jìn)行調(diào)整

獲取樣本

在流式細(xì)胞儀上獲取樣本，或在光保護(hù)下孵育30分鐘后固定，2-8°C儲(chǔ)存以供后續(xù)獲取，最多可儲(chǔ)存5天

訂購(gòu)代碼

FK-CCR 100次測(cè)試

CE0123

我們的用戶

美德聲提供的產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于各類臨床實(shí)驗(yàn)室，公共衛(wèi)生中心實(shí)驗(yàn)室，CDC疾病控制中心實(shí)驗(yàn)室等需要高質(zhì)量檢測(cè)單位。

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