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DNA合成儀原理
閱讀：1732 發(fā)布時(shí)間：2019-6-8
DNA的固相合成。
即DNA3'端固定于基質(zhì)上，然后沿3'向5'方向依此添加核苷酸直至合成所需的DNA片段。不同于應(yīng)用DNA聚合酶的DNA合成。
合成過(guò)程
個(gè)堿基的3‘末端固定在樹(shù)脂上，下一個(gè)堿基的5’-OH用二對(duì)甲氧三苯甲基DMT保護(hù)，堿基上的氨基用苯甲酸保護(hù)，然后對(duì)3‘-OH用氨基磷酸化合物進(jìn)行活化。
1。1個(gè)堿基的5’-OH和下個(gè)堿基的3‘-OH形成亞磷酸三酯，
2。然后用碘氧化成磷酸三酯
3。加入CHCl2COOH除去第二個(gè)堿基5’-OH上的保護(hù)劑DMT
循環(huán)進(jìn)行加入下一個(gè)堿基
合成完畢后
1。用苯硫酚除去5’-OH上的保護(hù)劑DMT
2。用濃氫氧化銨將片段與固體樹(shù)脂斷開(kāi)，洗脫
3。用濃氫氧化銨在加熱的條件下除去堿基上的保護(hù)劑
4。除去氫氧化銨，真空抽干
5。液相色譜或者PAGE，回收片段長(zhǎng)的。