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上海仁捷生物科技有限公司

人(THSD7A)ELISA試劑盒,反應(yīng)蛋白7A域檢測原理及范圍

時間:2019/3/4閱讀:2504

人(THSD7A)ELISA試劑盒,反應(yīng)蛋白7A域檢測原理及范圍

實驗原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被人反應(yīng)蛋白7A域(THSD7A)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人反應(yīng)蛋白7A域(THSD7A)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

注意事項:

  • 嚴(yán)格按照規(guī)定的時間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
  • 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
  • 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。
  • 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。
  • 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。
  • 在儲存和溫育時避免強(qiáng)光直接照射。
  • 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
  • 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。
  • 不能使用過期產(chǎn)品。
  • 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應(yīng)管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置

操作步驟

  1.   從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
  2.   設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
  3.   樣本孔待測樣本50μL;空白孔不加。
  4.   除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
  5.   棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
  6.   每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
  7.   每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。
  •  檢測范圍3.75 ng/mL  120 ng/mL
  •  靈敏度:低檢測濃度小于0.1 ng/mL。
  •  特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
  •  重復(fù)性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ,板間變異系數(shù)小于15% 。

 

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